莫拉菌属的鉴定.docxVIP

莫拉菌属的鉴定1、标本要求： 1.1 尽量用药前采集标本。1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。1.4 粪便：病人留取粪便510g，送检。1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。血标本不要冷冻。1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、巧克力平皿、麦康凯平皿、1％盐酸四甲基对苯二胺水溶液、氧化发酵(O-F)培养管、尿素培养管、明胶纸片、硝酸盐培养管、DNA培养管、湖南长沙天地人非发酵菌鉴定板。4、试验方法及原理：4.1 氧化酶用法：将滤纸片在1％盐酸四甲基对苯二胺水溶液中浸泡约1min，印刮平板上的菌落。结果观察：10s内观察颜色变化，变红－紫黑色为阳性，不变为阴性。4.2 Hugh-Leifson氧化发酵(O-F)培养管用法：用针挑取可疑菌落穿刺接种于O-F培养基中，35℃培养过夜。结果观察：高层上半部分变黄，为氧化型产酸；整个培养管变黄，为发酵型产酸；不变或变蓝为阴性。4.3 尿酶试验方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养管中，孵育过夜，观察结果。结果：培养管变红为尿素阳性，不变色为阴性。4.4 明胶液化试验方法:挑取血平皿上的菌落接种于肉汤中，在其中放入明胶纸片，于37℃水浴孵24h。结果观察：如果浸泡于肉汤中的纸片变透明示结果阳性，如果没有变化示结果为阴性。4.5 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养管中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。（2）．某些细菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。4.6 DNA酶试验方法：将待检菌接种于DNA酶培养管中，35℃培养18－24h，观察结果。结果观察：培养管变为黄色为阳性，不变色为阴性。5、常规鉴定过程：5.1形态与染色：革兰阴性球杆菌，其菌体大小为2.0μm×1.2μm，呈双短链状排列，具有多形性。幼龄菌为细杆状，老龄菌多呈球状。5.2培养特性：需氧，本菌营养要求较高，首次培养最好加入兔血或其它动物血清及心脑浸液。在血平板上生长良好，最适生长温度32－35℃，部分菌株在普通培养基上可以生长，也可以在MAC上生长，但不能在SS琼脂上生长。血琼脂上24－48h出现针尖大小、圆形、凸起、光滑湿润、无色不溶血的菌落。在加入兔血或其它动物血清及心脑浸液的血平板上经35℃，24h培养后，可见针尖大小到直径2mm之间的圆形凸起、光滑、半透明、边缘整齐不溶血的菌落，有的菌落培养数日后，菌落周围出现绿变区，时间延长可见柠檬色素至黄色素不散。5.3生化反应及鉴定要点:本菌形态上与奈瑟菌属及布兰汉菌属较相似，所以鉴定时一定要注意区分（具体见表1）。本菌氧化酶阳性，触酶阳性，无动力，不分解任何糖类，吲哚试验阴性。目前与临床有关的有七中菌种，分别为缺陷莫拉菌（M.lacunata），犬莫拉菌(M.canis)，非液化莫拉菌(M. nonliquefaciens，亚特兰大莫拉菌(M.atlantae)，林肯莫拉菌(M.linconii)，苯丙酮酸莫拉菌(M.phenlylpyruvica)，奥斯陆莫拉菌(M.osloensis)，具体鉴别见表2：表1：莫拉菌属与其它菌的鉴别试验莫拉菌奈瑟菌布兰汉菌不动杆菌球杆状+--+氧化酶+++-葡萄糖-+/--VDNA酶--+-亚硝酸盐-+/-V-注：＋表示全部菌株阳性，－表示全部菌株阴性，V表示不定。表2：莫拉菌属间鉴定试验项目缺陷莫拉菌非液化莫拉菌犬莫拉菌林肯莫拉菌奥斯陆莫拉菌亚特兰大莫拉菌苯丙酮酸莫拉菌麦康凯生长--+-V+V42℃-VND-DVV尿素酶------+苯丙氨酸脱羧酶D--ND--+明胶水解+------硝酸盐还原+++-V-V亚硝酸盐还原--VV-V-DNA酶--+----注：＋表示全部菌株阳性，－表示全部菌株阴性，V表示不定,ND表示无数据。6、药敏试验：6.1挑取单个麦康凯平板上单个菌落(革兰染色阴性杆菌,氧化酶阳性),配成0.5麦氏单位药敏液,滴加于天地人肠杆菌属药敏板中进行药敏试验,结果通过天地人药敏软件判读。具体可参看天地人药敏板半自动操作规程。6.2本菌属多数菌株对青霉素敏感，对头孢类你、四环素类、喹诺酮类、氨基糖甙类药物均为敏感。若是脑膜炎或脑炎，脑脓肿应注意药物通过血脑屏障的问题。7、临床意义