用细菌基因组DNA提取试剂盒(盒离心柱型)提取DNA.docVIP

用细菌基因组DNA提取试剂盒（盒离心柱型）提取DNA。 具体步骤如下： (1)收集WH-2对数生长期（12h~16h）的菌体； 取培养13h的菌液4.5mL，分三次每次1.5mL，10000r/min，离心1 min，尽量吸尽上清液，收集沉淀。 (2)向菌体沉淀中加入200μL缓冲液GA，震荡至菌体彻底悬浮均匀； (3)向管中加入20μL的蛋白酶K溶液，充分混匀； (4)加入220μL缓冲液GB，震荡15s，70℃水浴加热10min； 溶液变清亮后，4000 r/min，1 min离心以除去管盖内壁水珠。（若溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可以导致DNA提取量少和提取出的DNA不纯，可以再70℃水浴加热5min）。 (5) 加入220μL无水乙醇，充分振荡混匀15s（此时可能出现絮状彻底），4000 r/min，离心15s，除去管盖内壁水珠。 (6) 将上一步所得溶液加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中)，12,000r／min离心30s，倒掉收集管中废液，将吸附柱CB3放回收集管中。 (7)向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD(GD在使用前先加入无水乙醇)，12,000r／min离心30s,倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 (8)向吸附柱CB3中加入700 μL漂洗液PW(PW在使用前先加入无水乙醇)，12,000r／min离心30s,倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 (9)向吸附柱CB3中加入500 μL漂洗液PW，12,000r／min离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 (10)将吸附柱CB3放回收集管中，12,000r／min离心2min，尽量除去漂洗液。 将吸附柱CB3置于室温放置数分钟（大于30 分钟），彻底晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（PCR等）实验。 (11)将吸附柱CB3放入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加70μL洗脱缓冲液TE，室温放置2min，12,000r／min离心2min收集DNA溶液。 优化步骤，先加入洗脱缓冲液TE50μL，离心后将离心管中溶液移回吸附柱CB3，再加入洗脱缓冲液TE20μL。 (12) DNA溶液分装。