产弹性蛋白酶菌株的选育及发酵动力学研究.pdfVIP

摘 要 本文研究了产弹性蛋白酶菌株的选育、菌株的初步鉴定，发酵条件的优化, 以及菌株的发酵动力学方面的研究，并在现有的条件下，对粗酶的固定化进行 了初步的探索。 从合肥肉联厂附近土壤和污水中分离得到了 19 株产弹性蛋白酶菌株，其中 有三株产酶相对较高,对其中一株发酵产酶条件进行了初步研究，通过一系列菌 株的形态学特征鉴定和生理生化特征实验的研究，结合相关文献对菌株作了初 步鉴定，该菌株为产弹性蛋白酶气单孢菌属，菌株经过紫外线诱变，诱变剂量 为 30s 照射，菌株产酶活性提高 65%，再通过硫酸二乙酯（DES）化学诱变，诱 变剂量为 1%浓度处理 40min，使菌株酶活进一步提高到 120%，最后将两种诱变 方法结合使用，采用紫外线照射 20s 后再用 DES 处理 20min,酶活产量比原始出 发菌株提高近 1.44 倍。 在此工作基础上，进一步研究了菌株产酶条件。实验结果表明，葡萄糖和 干酪素作为碳源和氮源最有利于该菌株产酶，酵母膏对产酶的影响不大，通过 正交试验确定其最适浓度配比为：2.0%干酪素、0.5%葡萄糖、0.4%酵母膏。发 酵条件初步研究结果表明：该菌株在 30℃、起始pH7.0、装液量 25ml/250ml、 发酵 28h 产酶量达到最大。该菌对氧的需求比较大，通过提供氧载体吐温-80， 也能够提高胞外酶的产量。 弹性蛋白酶发酵是一个很复杂的过程，为了分析研究小型发酵罐中力学特 性，探索大规模发酵生产的可行性，在摇瓶发酵培养基优化和发酵条件优化的 基础上，我们在 14L 发酵罐中进行了放大试验，探讨罐中分批发酵动力学特征， 建立了发酵过程菌体生长、产物生成及基质消耗随时间变化的数学模型。 Logistic 方程、Luedeking-Piret 方程能够很好地分别描述产弹性蛋白酶菌体 生长；发酵产酶过程和基质消耗过程。并将 3 个动力学模型的预测值和实验值 进行了比较，所建立的分批发酵动力学模型能较好地反应弹性蛋白酶分批发酵 过程。 通过聚乙烯醇包埋法和聚乙烯醇为载体戊二醛作为交联剂共价交联法对弹 性蛋白酶粗酶进行了固定化的研究，实验表明，共价交联法固定化后每克载体 I 酶活回收率能够达到较高水平，酸性环境中稳定性增强，经过 6 批次弹性蛋白 分批水解，酶活仍有残留，具有一定的操作稳定性，本研究内容为以后的纯酶 固定化奠定了基础。 关键词：弹性蛋白酶，筛选，诱变，发酵罐，动力学模型。 II Abstract In this study ，elastase-producing strain was screened and breed ．And then the cultivation process and technology of this elastase-producing strain were fully discussed ．The batch process and kinetic model were determined ． Meanwhile the immobilization of crude enzyme was studied ． 19 strains bacteria secreting extracellular elastase were isolated from soil and polluted water samples ，3 of them pocceessed considerably high elastiolytic activity ．The bacterial strain was preliminarily identified belong to Aeromonas Stanier The optimum elastase-producing conditions were studied by flask-shaking fermentation ．The optimal combi