MF054-二代测序快速DNA建库试剂盒NGSFastDNALibraryPrepSet.doc

M5 NGS Fast DNA Library Prep Set for Illumina使用说明书 产品名称 单位 货号 M5 NGS Fast DNA Library Prep Set for Illumina 24T MF054-01 M5 NGS Fast DNA Library Prep Set for Illumina 96T MF054-04 【储存条件】 -20?C保存，干冰运输。 【试剂盒组分】 MF054-01(24T) MF054-04(96T) 10x End Repair Reaction Buffer 200祃 800祃 End Prep Enzyme Mix 48祃 192祃 T4 DNA Ligase Buffer 400祃 2x800祃 T4 DNA Ligase 48祃 192祃 HiFidelity 2xPCR Master Mix 600祃 2x1.2ml 【产品简介】 本二代测序快速DNA建库试剂盒（Illumina）提供了构建DNA文库需要的酶预混体系及反应缓冲液，包含除接头以外的所有成分，制备的文库可用于illumina二代测序平台的测序。和常规建库方法相比，该试剂盒将多个步骤进行了合并，整个建库过程只有两个纯化步骤，因此显著降低了起始模板DNA的最少需求量，缩短了文库构建时间。另外，试剂盒采用高保真DNA聚合美进行文库富集，无偏好的PCR扩增，扩大了序列覆盖区域，可以高效的制备用于illumina二代测序平台的DNA文库。试剂盒中所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性。 【产品特点】 1. 末端补平，磷酸化，加A一步完成。 2. 不需纯化，直接加接头。 3. 超保真扩增，最大程度降低了扩增偏好性。 4. 支持多种样本，且所得文库能够用于Illumina GAllx，HisacnSQ，HiSeq 2500/2000/1000和MiSeq sequencing等平台。 【自备仪器、试剂和耗材】 磁力架：建议使用Life公司的磁力架DynaMag（Cat No. 12321D）。 DNA纯化回收试剂盒：建议使用聚合美磁珠法DNA纯化回收试剂盒（货号MF050） 样本接头引物试剂盒：建议使用聚合美二代测序多样本接头引物试剂盒I/II（Cat No.MF056/MF057） 无水乙醇，EB（10mM Tris-HCl，pH8.0），去离子水（pH在7.0-8.0）。 反应管：建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管。枪头：建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染。 【实验前准备及注意事项】 1．避免试剂反复冻融，建议首次使用时将Buffer进行分装保存。酶在使用完尽快放回-20?C保存。 2．PCR产物因操作不当极易产生污染，导致实验结果不准确，建议将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化区隔离，并使用专门的移液器，定期对各实验区进行清洁。 【DNA建库流程示意图】 补平、磷酸化、加A一步完成，而且前两部可以在一管中完成 从起始材料到得到DNA文库只需2小时40分钟。 起始材料：5ng-1μg 打断的双链DNA，溶于EB（10mM Tris-HCl，pH8.0）或去离子水中。 DNA纯度要求：OD260/OD280=1.8-2.0。 【DNA末端修复反应】 1．向200μl PCR管中加入以下成分，用枪头将上述溶液轻轻混匀，瞬时离心使所有组分收集到管底。 试剂名称 体积 10x End Repair Reaction Buffer 6.5μl End Prep Enzyme Mix 2μl Fragmented DNA X (5ng-1μg) RNase-Free Water Up to 65μl 2．将管子置入PCR仪中，热盖打开，反应程序如下： 12?C 15 min. 37?C 15 min. 72?C 20 min. 然后置于4?C。 【Adaptor 连接】 建议使用聚合美的adaptor进行连接，也可以选择使用NEB、Illumina公司的adaptor，具体连接方法可以参考各公司的产品说明书。以下为使用聚合美adapto