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糖类脂蛋白质检测
还原糖(葡萄糖、麦芽糖、果糖)
脂肪
蛋白质
淀粉
实
验
材
料
含糖量高的生物组织或器官,颜色为白色或无色。
如:苹果或梨匀浆、白色甘蓝叶、白萝卜。
富含脂肪的种子
如:花生种子(浸泡3-4h)、花生种子匀浆
富含蛋白质的生物组织
如:豆浆、鲜肝提取液、鸡蛋清
富含淀粉的生物组织
如:马铃薯匀浆
实
验
原
理
还原糖与斐林试剂反应生成砖红色沉淀
(还原糖中游离的醛基或羰基将斐林试剂中的Cu2+还原成Cu2O沉淀。)
脂肪被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色(或被苏丹Ⅳ染成红色)。
蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应,(双缩脲试剂中的Cu2+在碱性条件下与蛋白质中的肽键结合成紫色络合物)
淀粉遇碘变蓝
化学
试剂
斐林试剂
(或班氏试剂)
苏丹Ⅲ染液
(苏丹Ⅳ染液)
双缩脲试剂
碘液
实验
现象
砖红色沉淀
橘黄色(或红色)脂肪颗粒(显微镜下看到)
紫色
蓝色
斐林试剂
双缩脲试剂
组
成
甲液:0.1g/mL的NaOH溶液;
乙液:0.05g/mL的溶液。
A液:0.1g/mL的NaOH溶液;
B液:0.01g/mL的溶液。
原理
甲液和乙液混合后产生沉淀,与含醛基(—CHO)或羰基的可溶性还原糖,在加热条件下反应,将还原为砖红色的沉淀。
在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲()能与反应,形成紫色络合物。由于蛋白质分子中含有许多与双缩脲结构相似的肽键(—CO—NH—),因此,蛋白质都可以与双缩脲试剂发生反应而使溶液呈现紫色。
使用方法
现配现用、等量混合、水浴加热
现配现用,先向待测组织液中加1mLNaOH溶液形成碱性环境,再滴加少量溶液。
颜色变化
浅蓝色→棕色(混合色)→砖红色
无色→浅蓝色()→紫色。
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