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超高效液相色谱―三重四极杆质谱法测定大鼠海马及大脑皮层中生物胺类及氨基酸类神经化学物质 　　摘要 建立了超高效液相色谱三重四极杆质谱法检测大鼠海马和大脑皮层中生物胺类及氨基酸类神经化学物质含量的方法。选用Hypercarb（100mm×2.1mm，5μm）色谱柱，以0.1%甲酸甲醇为流动相，梯度洗脱。电喷雾离子源（ESI）在正离子模式下，选择多反应监测模式（MRM）扫描，对检测的6种生物胺类和11种氨基酸类神经化学物质分别选择一个定性离子对和一个定量离子对。测定Wistar大鼠海马和大脑皮层中6种生物胺类和11种氨基酸类神经化学物质的含量，对比两种不同脑组织样品前处理方法对神经化学物质含量测定结果的影响。17种神经化学物质在10min内即可完成同时测定，检测方法线性关系良好，日内和日间精密度、加标回收率和重复性满足分析要求。本方法准确、灵敏度高、专属性强、重复性好，适用于脑组织中生物胺类及氨基酸类神经化学物质的含量测定，可为生物胺类及氨基酸类神经化学物质提供有效的样品前处理方法和检测手段 关键词超高效液相色谱三重四极杆质谱法；生物胺类神经化学物质；氨基酸类神经化学物质；脑组织 1引言 神经递质（Neurotransmitter）在神经化学传递中是充当“信使”的特定化学物质。脑内神经递质分为4类，即生物胺类、氨基酸类、肽类和其它类。随着神经生物学的发展，陆续在神经系统中发现了大量具有神经活性的物质。生物胺类递质是最先发现的一类神经递质，包括多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、5羟色胺（5HT）。酪氨酸（Tyr）是DA、NE和E的前体，色氨酸（Try）是5HT的前体，在多种应激情况下，维持正常的生物胺类递质代谢和脑功能的发挥。5羟吲哚乙酸（5HIAA）是5HT代谢的产物，5HIAA的变化也可间接反应5HT的变化。褪黑激素（Melatonin）主要是由哺乳动物和人类的松果体产生的一种胺类激素，5HT在N乙酰基转移酶的作用下，转化成N乙酰基5羟色胺，最后合成Melatonin。生物胺类神经化学物质在人体和哺乳动物的中枢神经、心血管和内分泌等组织系统中发挥着广泛的调节作用，参与情绪、情感、应激行为和睡眠觉醒等多种生理过程[1＼]，含量的变化与人类多种疾病密切相关，是诊断阿尔茨海默症、唐氏综合征、抑郁症和帕金森等疾病的重要依据[2～5＼]。组胺（Histamine）是一种活性胺化合物，作为身体内的一种化学传导物质，可以影响许多细胞的反应，中枢组胺能神经系统影响脑部神经传导，参与睡眠、荷尔蒙的分泌、体温调节、食欲与记忆形成等功能[6＼]。乙酰胆碱（Ach）是中?械?碱能系统中重要的神经递质之一，其主要功能是维持意识的清醒，在学习记忆中起重要作用。被确定为神经递质的氨基酸有γ氨基丁酸（GABA）、甘氨酸（Gly）、谷氨酸（Glu）、天冬氨酸（Asp）、牛磺酸（Tau）和丝氨酸（Ser）[7＼]。谷氨酰胺（Gln）作为大脑的一种能量来源，具有保护大脑的功能，能改善心情、增强智力，并有益于长期与短期记忆[8，9＼]。氨基酸类神经化学物质对于调节机体生理活动具有重要作用，其含量及比例的变化与多种中枢神经系统疾病的发生及发展密切相关[2～5，10＼]。因此，生物样品中生物胺类及氨基酸类神经化学物质的准确测定对于某些疾病的筛查、诊断和治疗以及药物在体内的作用具有重要意义 神经化学物质在生物样品中的含量很低，而生物样品本身基体复杂，内源性干扰物质较多，因此高效快速的样品前处理方法和高灵敏度的检测手段是开展神经化学物质研究的难点。采用高效液相色谱分离，再以紫外、荧光、电化学和质谱方法检测，是测定神经化学物质较常用的方法[11～21＼]。由于氨基酸无紫外吸收，用液相色谱法进行检测时需对氨基酸进行柱前或柱后衍生[16～20＼]。生物胺类神经化学物质为强极性化合物，在反相色谱柱上保留极弱，对荧光和质谱的响应信号较弱，可通过衍生化处理改善色谱保留行为和离子化效率[16～19，21＼]。但衍生操作步骤繁琐，耗时耗力，而且衍生程度也难以保证，JP衍生反应还可能生成非目标衍生物，这些对神经化学物质的准确测定都会产生影响。目前，HPLCMS/MS兼具分离能力强和灵敏度高的优势，已逐渐发展成为复杂生物体系中痕量生物活性物质分析的强有力手段[22～26＼] 本研究采用超高效液相色谱三重四极杆质谱法建立了对大鼠海马和大脑皮层中生物胺类及氨基酸类共17种神经化学物质同时快速分析的方法。本方法的选择性和重现性好，灵敏度高，并且无需对样品进行衍生化和固相萃取等复杂的前处理，简化了分析步骤，提高了分析效率。对比了两种不同脑组织样品前处理方法对神经化学物质含量测定结果的影响。本方法可应用于脑组织中生物胺类及氨基酸类神经化学物质的分析测定，为临床检