贴壁培养与悬浮培养的区别.pptxVIP

贴壁细胞培养与悬浮细胞培养的区别 蔓荆子 2013.11.08 概念 细胞类型 接种方式 培养条件 细胞形态 生长过程 传代培养 贴壁细胞培养：细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。 悬浮细胞培养：细胞生长不依赖于支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。 1 概念 2 细胞类型 适合贴壁培养的细胞：包括原代细胞在内的大多数细胞类型。主要包括正常细胞和肿瘤细胞，比如成纤维细胞，骨骼组织（骨及软骨），心肌与平滑肌、肝、肺、肾、乳腺皮肤神经胶质细胞，内分泌细胞，黑色素细胞及各种肿瘤细胞等 适合悬浮培养的细胞：适应悬浮培养的细胞及无粘附的细胞。一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，尤其是血液白细胞，淋巴细胞。植物细胞。 3 接种方式 贴壁培养 PBS冲洗血液，去掉脂肪组织，切成小块，消化液消化，培养液培养。 植物细胞的悬浮培养 由完整的植物器官分离单细胞 机械法 酶解法 由愈伤组织分离单细胞 水曲柳悬浮细胞系的建立 1 丁小萌，闫俊崎，周 博，齐凤慧。水曲柳愈伤组织诱导及悬浮细胞系的建立。中国农学通报，2013,29（25）:21-25 香花槐愈伤组织及悬浮培养的细胞 1胡海英，赵亚美，阎晓磊，王华芳。香花槐愈伤组织及细胞悬浮培养技术。北京林业大学学报，2007,29（5）:26-30 4 培养条件 贴壁细胞培养 悬浮细胞培养 容器 需要使用经过组织培养处理的容器 使用未经过组织培养处理的容器，但需搅拌或摇晃 设备 贴壁细胞培养 悬浮细胞培养 温度 人和哺乳动物细胞系：36-37℃ 昆虫细胞系：27℃ 禽类细胞系：38.5℃ 冷血动物：15-26℃ 植物悬浮细胞系：23-27℃ pH 哺乳动物系：7.0-7.4 成纤维细胞系：7.4-7.7 植物细胞：5.6-6.0 培养基 需血清 悬浮培养基可不需血清 5 细胞形态 贴壁培养细胞：成纤维细胞型 上皮细胞型 游走细胞型 多型细胞型 悬浮培养细胞：悬浮型 成纤维细胞型 名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的。 来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞，心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮。 形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核。 生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。 人心肌细胞 人绒毛间充质成纤维细胞 上皮细胞型 名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同。 来源：来源于外胚层、内胚层细胞, 如：皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤。 形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆形核。 生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状 生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动。 人大肠上皮粘膜癌细胞 人小气道上皮细胞 游走细胞型 生长特点：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游 走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以 和其他细胞相区别。 小鼠腹腔分离的单核巨噬细胞 多型细胞型 生长特点：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。 大鼠皮质神经细胞 胎鼠神经干细胞 皮层神经细胞 人PBMC细胞 悬浮培养细胞 淋巴母细胞 T淋巴细胞白血病细胞 岷江百合细胞 继代4次后的文冠果细胞 悬浮培养初期的棉花细胞 分裂旺盛的胡萝卜细胞 1 姜新超，刘春。岷江百合悬浮细胞系的建立及植株再生。园艺学报，2011,38（2）:327-334 2 刘磊，顾玉红。文冠果悬浮细胞系建立及细胞生长特性。林业科学，2011,46（9）：79-83 6 生长过程 潜伏期：悬浮,胞质回缩, 全部细胞变为圆球形。贴附底物。有运动活动,基本无增殖, 少见分裂相。 指数增长期：是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶段培养物中细胞数量呈指数增长,细胞群体均一。 停滞期：细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。 7 传代培养 贴壁细胞 酶消化法传代：弃去培养液，加胰酶消化，加培养液终止胰酶作用，离心，去上清，吹打成悬液，分装传代。 悬浮细胞 离心法传代：离心，弃上清液，加新鲜培养基，分装传代。 直接传代法：待细胞沉淀，倾去1/3-2/3培养液，用吸管吹打形成细胞悬液再传代。 贴壁培养 悬浮培养 适合包括原代细胞在内的大多数细胞类型 适合已适应悬浮培养的细胞以及其他一些无粘附性的细胞 需要定期传代，但是易于通过倒置显微镜观察。显微镜下观察形态多种。晃动培养液时，细胞不动 较易传代，但是需要每天进行细胞计数和存活率测定。显微镜下观察呈圆形。晃动培养液时，细胞也随着漂动 利用酶