人成骨细胞与外周血单核细胞共同培养诱导破骨 ... - 中国骨质疏松杂志.PDF

中国骨质疏松杂志 2003年 2月第 9卷第 1期 ．n』 23 · 论 著 · 人成骨细胞与外周血单核细胞共 同培养 诱导破骨细胞样细胞 杨旭 杨庆铭 邓廉夫 许福平 【摘要】 目的 探讨人外周血单核细胞与原代人成骨细胞共同培养体外转化为破骨细胞样细胞 的条件 。并观察其体外生长、功能情况 。方法 分别分离培养人成骨细胞 ，外周血单核细胞 ，并在含 1，25(0H)2D3(100m0l／L)，地塞米松(10 mol／L)及巨噬细胞集落刺激因子 (M—CSF)(25I m1)的条件 液 中共同培养 。用相差显微镜 ，抗酒石酸酸性磷酸酶染色( )观察破骨细胞样细胞生长情况 ，应用 扫描 电镜(SEM)观察骨片陷窝以反映其功能。结果 共同培养中的单核细胞逐渐融合；TRAP染色阳 性多核细胞在第 7天 明显增多；骨片陷窝呈现多种形态。结论 人原代成骨细胞与人外周血单核细 胞共 同培养可 以诱导出破骨细胞样细胞 ，但应该选择分化程度较低 的细胞 以及控制接种密度 。 【关键词】 成骨细胞； 单核细胞 ； 破骨细胞样细胞 ； 共同培养 Ilumanprtm,．~ osteoblastsandperipheralbloodmonocytescoculturetoinduceosteodast-likecells YANG Xu，YANGQi， i ，DENGI ，eta1．ShanghaiInstituteofTraumat~logyO 叩 ；DepartmentofOr— thopaedics，RuijinHopsital，SecondShanghaiMedicalUniversity，Shanghai200025，China A【bstract】 Objective Toexplorethecultureconditionforcoculatreofprimaryhumanosteoblasts(OBs) andmonocytes(MCs)inbloodtoinduceosteocalst—likecellsandobservetheirgrowthandfunction． Method OBsnadMCsisolatedseparatelywerecoculturedinconditionedmediumcontaining1，25(OH)2D3(10 mol／L)， dexamathasone(10 moVL)nadMCSF(25ns／m~)．Thegrowthnadfunctionofosteoclast—likecellswereassessde byphasecontrastmicroscope，TRAP stainingnadSEM ． Results MCsfusedtoform muhinucleatedcellsaround OBs．Mnay TRAP-positive multinucleated cellsappeared after7 days．Th e pits onbone slices showed various ofrms．Conclusion Th ecocuhureofprimaryOBsnadMCsinbloodCna induceosteocalst—likecells，whilehtedif- ferontiatlonstageofOBsnadplatingdensity arcvitalpo intsforgoodresults． 【Keywords】 Osteoblast；Monocyte； Osteoelast—likeceU； Coculture 破骨细胞是 由其前体细胞融合而成的终末细 材料和方法 胞，不具备分裂能力，通常位于骨转化活跃的钙化骨 基质表面 ，体外分离较 困难 。国外用基质细胞或成 1．人成骨细胞分离培养 ：按参考文献 [2]方法 ： 骨细胞系细胞与破骨细胞前体细胞共 同培养 ，在体 取全髋置换术 中的松质骨碎片 ，清除软组织 ，用组织 外诱导破骨细胞样细胞 的实验模型应用较广 ，目前