安肠愈疡汤合加味生肌散对实验性溃疡性结肠炎大鼠的药效学研究论文.docVIP

　　安肠愈疡汤合加味生肌散对实验性溃疡性结肠炎大鼠的药效学研究论文 石敏，迟莉丽，戴霞，孙大娟，常芳芳，孟涛 【摘要】 目的观察安肠愈疡汤合加味生肌散的抗炎、镇痛作用及对实验性溃疡性结肠炎的疗效。方法采用二甲苯致小鼠耳廓炎症及热板法致疼痛模型，观察安肠愈疡汤合加味生肌散的抗炎镇痛作用。采用2，4.freell（由本院中药房提供）；阿斯匹林：0.3 g/片，鲁抗制药有限公司生产，批柳氮磺胺吡啶（SASP）肠溶片：0.25 g/片，上海信谊嘉华药业有限公司生产，批；醋酸泼尼松：上海三维制药有限公司生产，批二甲苯，北京益利精细化学品有限公司，批；冰乙酸，北京益利精细化学品有限公司，批2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS )购于北京邦定泰克生物技术有限公司；髓过氧化物酶(MPO)购于南京建成生物工程研究所，试剂批721型分光光度计，上海第三分析仪器厂；超声波细胞粉碎机，型号:JY92-Ⅱ，宁波新芝科器研究所制造；酶标仪Bio-RAd,250型，美国制造。 2 方法 2.1 抗炎实验观察各组对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响。取小鼠75只，随机分为5组：空白对照组，泼尼松组，安肠愈疡汤组，加味生肌散组，安肠愈疡汤合加味生肌散组，每组15只。按0.02 g 药物/g体质量分别给予相应药物灌胃或/和灌肠，空白对照组给予等体积生理盐水，1次/d，连续3 d，在末次给受试药物1h后，于每只小鼠右侧耳壳正、反两面均匀涂抹致炎剂(二甲苯)，0.05 ml/只，1 h后处死小鼠，于双耳分别取直径6 mm的耳片，以两耳片重量之差作为肿胀度，求出给药组的肿胀抑制率。 2.2 镇痛实验观察各组对小鼠热板法镇痛实验的影响。取小鼠75只，分组及给药同上，各组15只。给药前先测各鼠的痛阈值。调节恒温装置使水温控制在（55±0.5）℃，每次在热板上放1只小鼠，将合格小鼠随机分为5组，重复测其正常痛阈平均值，作为该鼠给药前痛阈值。然后按0.02 g药物/g体质量分别给予相应药液（同前）灌胃灌肠，空白对照组给予等体积生理盐水，1次/d，连续3 d，分别于末次给药后30，60，90 min测小鼠痛阈值。 2.3 观察各组对UC大鼠结肠大体形态和组织学损伤及MPO活性的影响 2.3.1 动物分组取雄性SPF级(体质量180～200 g)SD大鼠90只，随机分成正常对照组、模型组对照组、安肠愈疡汤合加味生肌散组、安肠愈疡汤组、加味生肌散组、柳氮磺胺吡啶（SASP）组，每组15只，除正常对照组外，余复制UC模型。 2.3.2 大鼠溃疡性结肠炎模型建立采用2，4，6三硝基苯磺酸(TNBS)法造模［4］：将大鼠禁食(不禁水)24 h后1％硫喷妥钠溶液腹腔注射麻醉，用直径2.0 mm的硅胶管由肛门轻缓插入深约6 cm处的肠腔内，将30 mgTNBS(0.6 ml)的50%乙醇(0.25 ml)溶液0.85 ml快速注入，待麻醉清醒后正常喂养。 2.3.3 给药方法造模后第3天开始用药，正常对照组和模型组对照组给予生理盐水，按10 m1/kg体质量灌胃；安肠愈疡组：给予安肠愈疡汤浓煎剂，按0.02 g生药/kg体质量灌胃；加味生肌散组：给予加味生肌散浓煎剂，按0.02 g生药/kg体质量灌肠；安肠愈疡汤合加味生肌散组：给予安肠愈疡浓煎剂灌胃同时予加味生肌散浓煎剂灌肠，SASP组：给予SASP混悬液,按0.3 g/kg体质量(相当于人的中等治疗量)灌胃，以上各组均10 ml/kg体质量，1次/d，连续用3周。 2.3.4 取材用药3周后,各组存活大鼠一并处死取材：取距肛门以上约6 cm结肠段，根据炎症损伤程度进行结肠组织大体形态损伤评分。评分标准［5］：0分：无损伤；1分：局部充血、水肿但未出现溃疡；2分：有溃疡，但没有明显炎症；3分：有溃疡，仅有一处出现炎症；4分：有多处溃疡和炎症，溃疡大小 1 cm；5分：有多处溃疡和炎症，至少有一处溃疡大小 1 cm。然后取病变最明显处肠组织0.5 cm,以甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，HE染色，镜下评价炎症和溃疡等［6］。再留取各大鼠结肠病变最明显处组织若干，干冰速冻，置-80 ℃冰箱冷冻保存以备检测MPO。 2.3.5 髓过氧化物酶(MPO)活性测定取融冻后大鼠结肠组织，入缓冲液中，经匀浆、4 000 r/min离心15 min，上清液加入50 mmol/L PBS 2.9 ml中(含0.167 g/L邻联二茴香胺和0.000 5%的H2O2)于460 nm处测吸光度A值，5 min后再次测定，2次A值相差数除以5，即为该样品的MPO单位。1单位MPO活性表示25℃下1 min内将1 μmol H2O2