安脉颗粒提取工艺的正交优选论文.docVIP

　　安脉颗粒提取工艺的正交优选论文 .freelasil?-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液(12∶88),流速：1.0 mL/min, 检测波长327 nm1,理论塔板数不低于1 500。表1 提取因素水平表（略） 2.2.2 对照品溶液的制备 精密称定绿原酸对照品适量,置棕色量瓶中,加50%甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液,即得(10 ℃以下保存)。 2.2.3 供试品溶液的制备 精密吸取醇提样品液2 mL,加蒸馏水稀释至25 mL,离心,取上清液,供测定用。其余50%、60%、70%乙醇回流提取液各取3份,分别精密吸取2 mL,加30%甲醇稀释至25 mL,离心,取上清液,供测定用。 2.2.4 供试品的测定 精密量取上述对照品和各供试品溶液,注入液相色谱仪,测定并计算含量。色谱图见图1。 2.3 肉桂酸含量测定 2.3.1 色谱条件 Kromasil?-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,甲醇-0.1%磷酸溶液(54∶46)为流动相,检测波长为278 nm2,理论塔板数不低于1 500。 2.3.2 对照品溶液的制备 精密称定肉桂酸对照品适量,置量瓶中,加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液,摇匀,即得。 2.3.3 供试品溶液的制备 精密吸取水提样品液2 mL,加蒸馏水稀释至25 mL,离心,取上清液,供测定用。其余50%、60%、70%乙醇回流提取液各取3份,分别精密吸取10 mL,加50%甲醇稀释至25 mL,离心,取上清液,供测定用。 2.3.4 供试品的测定 精密量取上述对照品和各供试品溶液,注入液相色谱仪,测定并计算含量。色谱图见图1。 2.4 数据处理 用多指标试验全概率法3进行数据处理。设Bi为第i号试验,Aj为第j个指标。i＝1,2……n；j＝1,2……k；且A1,A2……An互不相容,又设各指标的重要程度之比为A1∶A2∶……∶Ak＝m1∶m2∶……∶mk,则 P(Aj)＝mj/N,j＝1,2……k 1 以Xij表示第j个指标下的第i个测定值,以Sj表示第j个指标下各次(n次)试验结果的和,即： Sj＝ Xij i＝1,2……n,j＝1,2……k,则 P(B1/A1)＝Xij/Sj 2 于是全概率公式为： P(Bi ＝∑P(Aj)P(Bi/Ai) i＝1,2……n 3 3式即为同时兼顾各指标综合效应的全概率公式。本例由于2个指标同等重要,互不相容,为方便起见,可按下式计算同时兼顾各指标综合效应的全概率公式,结果见表2。 P(Bi)＝P(Bi/A1)＋P(Bi/A2) i＝1,2……n 2.5 结果分析 正交试验结果见表2,方差分析结果见表3。表2 L9(34)提取正交试验结果(略)表3 综合得分方差分析(略)注：F0.01(2,2)=99.00,F0.05(2,2)=19.00 表3表明,B、C因素不同水平之间有显著性差异,结合Ki值,其最佳的因素水平为A3B3C2D1。即最佳醇提工艺为以药材饮片投料,加9倍量的70%乙醇,回流提取2次,每次1.0 h。 2.6 提取工艺验证 按比例称取药材,共3批。以上述最佳醇提工艺考察并验证最佳工艺,样品处理及测定方法同上。分别测定绿原酸和肉桂酸的含量(见表4)。试验结果显示：优化提取的结果与正交表中的最优水平相接近,说明本研究所确定的工艺合理可行,可操作性强。表4 水提取最佳工艺验证试验结果(略) 3 讨论 本处方中有多味药材,其制剂工艺的评价如采用单一指标则代表性较差,用不同种类的成分作为评价指标其结果有较广泛的代表性。但由于成分含量不在同一数量级,直接累加则使数量级大的对结果的贡献大,而小的则贡献小,不符合组方原则及治则。通过概率转化可使不同量纲及不同数量级的数据整齐化,且包含了原始数据的可比信息,可直接累加。 从表3可知,因素B对试验结果影响极显著(P 0.01),因素C对结果影响显著(P 0.05),而因素A对试验结果影响不显著。根据正交试验绿原酸、肉桂酸提取率可见,样品中绿原酸、肉桂酸的含量会因乙醇用量的增加而明显升高,因此选择9倍量的溶剂。综合绿原酸、肉桂酸提取率,选择提取2次为最佳条件。 在流动相的选择中,经反复试验摸索,选择酸性流动相,因绿原酸、肉桂酸为有机酸,酸性可抑制其电离,出峰时间早,峰形稳定,分离度好。 笔者在正交试验的基础上对提取工艺进行了试验考察,优化提取的结果与正交表中的最优水平一致,可以作为安脉颗粒提取工艺的 【