张继宗 药学三班2013213067 简介 肌凝蛋白包括一个ATP从属的马达蛋白 ....DOC

张继宗 药学三班2013213067 简介 肌凝蛋白包括一个ATP从属的马达蛋白，它在细胞进程中比如肌肉萎缩、细胞分裂、囊泡转运和细胞机动性等相关机能转变中发挥了重要的作用。某些疾病与这些蛋白的功能性改变有关。人心脏肌球蛋白重链儿（MYH7）的突变与一些心脏疾病有关，尤其肥大性心肌症（HCM），这被人广泛熟知。将近45%的已知的HCM突变被发现早在MYH7上，但是它们当中的大部分的机能目前还是未知的。阐明这些突变的机制对研制治疗该病的药物至关重要。 UNC-45分子伴侣蛋白被发现对肌球蛋白的折叠和积累非常必须，比如厚丝状物的组装和肌肉的功能。UNC-45B蛋白的转化，事实上仅仅可以用来解释脊椎动物，该蛋白与UNC-45B在氨基酸排布顺序上有44%的相似性并且主要表达在心肌和骨骼肌。最近，UNC-45B在心脏肌球蛋白的稳定性、肌纤维的心肌收缩功能以及心肌疾病的预防上发挥的重要作用被人们所揭示。而后者是最为常见的人类或者动物的遗传疾病，也是年轻运动员猝死的一个最主要原因。扩张的心肌病变与UNC-45B的缺乏相联系，并且在肌球蛋白拆卸的实验中被模仿出来，从而表明UNC-45在对心肌疾病的治疗中可能会是一种药物的靶标。 此外，最近UNC-45在乳腺癌肿瘤的增长的过程中发挥的至关重要的作用被人们揭示出来。由于被观察到在肿瘤细胞中过度表达，约四倍于正常细胞，所以该蛋白在乳腺癌的治疗中可能是一个靶点。 许多肌球蛋白的化学结构X光衍射已经完成。分子伴娘蛋白与UNC-45/CRO1/She4p(UCS)偶联领域的原子构成最近已经获得两种，即真菌She4p和果蝇UNC-45。这种偶联的酵母肌球蛋白的抗原决定基，例如Myo3p和Myo4p被定为出来并且锁定在肌球蛋白头部的羧基端区域，但是UNC-45抗原表位却没有被指定。然而，据悉肌球蛋白偶联在UNC-45的UCS领域。此外，大部分实验鉴定得出的发生在秀丽隐杆线虫和裂殖酵母上从而影响UCS蛋白功能作为重要调节肌球蛋白活性的突变在UCS领域上被鉴定出来。 UNC-45可以偶联分子伴侣Hsp90和肌球蛋白的事实已经被报道出来。偶联通过不同种类的领域并且Hsp90在对于UNC-45专属性上具有抑制作用该专属性是指UNC-45直接偶联在肌球蛋白的头部。UNC-45以这种方式控制着肌球蛋白和肌动蛋白的相互作用，这是因为它与肌球蛋白头部的偶联对体外高效的肌动蛋白偶联非常的重要。在这之前，与肌球蛋白相互作用的She4p已经在所有的五种酵母的肌球蛋白被绘制出。She4p的MYo4p相互作用区域已经被报道可以掩盖残基531-631。此外，更加完美的该相互作用的机制图也已经完成绘制，并且一个包含27-残基的长Myo4p区域也被提出。这个区域是高度守恒的，不仅是对于所有的五种酵母肌球蛋白而且对于被鉴定的肌球蛋白亚种也同样适用，这其中包括人类的心脏肌球蛋白。这种Myo4p与UCS区域偶联大概是将近1μM的亲和力。整个肌球蛋白-UNC-45B复合物的数据显示出一个明显的1.3μM的Kd值，从而证明UNC-45B与肌球蛋白的马达领域存在强烈的相互作用，其中该复合物最近可以通过多种实验技术获得。更加深入的研究发现，肌球蛋白的偶联位点已经通过不同于上面提到过的技术方法得到改善，总结出马达领域的SH1和SH2片段可能直接或者间接的参与在UNC-45B的相互作用里。然而，需要注意的是UCS的不同功能已经被提议或假设出来。这种蛋白第一次作为肌球蛋白折叠的分子伴侣被描述出来。随后的研究表明UCS被用在保护肌球蛋白防讲解上，并且能够加强肌球蛋白到肌动蛋白微丝的马达领域的偶联。 在这项研究当中，我们以X光数据分析为基础，提出了UNC-45B的UCS二聚体连接两个肌球蛋白马达领域并且因此肌球蛋白与肌动蛋白微丝的步长作为其中之一的决定因素发挥功能作用。事实上后者确实需要UNC-45-肌球蛋白复合物的形成。因此，UNC-45-肌球蛋白复合物的原子模型就首要的需要来回答几个重要的问题：（1）这种UNC-45特异性的UCS偶联位点在哪儿，它是怎么样和肌球蛋白发生相互作用的？（2）在这些相互作用里面它们是种间差异吗？（3）假如是表型的心脏病的肌球蛋白突变体，那么UNC-45B偶联是怎样改进的？并且如何反应在肌球蛋白-肌动蛋白的偶联上？为了回答这些问题，对于这件事上我们把精力集中在对野生型的复合物特征进行模型化，通过各种硅片方法。我们的目标是在原子水平上获得上述这种复合物的分子框架结构。我们的研究结果表明复合物的形成的稳定性主要依靠类似于表明接触的静电作用来支撑，这很像肌球蛋白和肌动蛋白的复合物。我们也获得了肌球蛋白偶联决定簇的非常重要的种间差异，并且提出了基于MYH7外显子15-16肥大性心脏病突变的分子模型。 材料和方法 同源建模，蛋白分子的准备