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选条的标准 革兰氏阴性杆菌分类 革兰氏阳性杆菌分类 定向试验 革兰氏阳性球菌分类 API 20E试剂条接种要点 先做氧化酶试验，氧化酶为阴性时接种API 20E,氧化酶为阳性时接种API 20NE试剂条． 塑料培养盒中加水5 ml,放入试剂条，记录标本资料。 取1个1mm 大小，18—24hr菌龄的菌落，分散于5ml悬浮液（20150）中，使达0.5 Mac Farland 浊度。 小心沿内壁加菌悬液到微量生化杯中。其中：有U形框标记的项目(CIT、VP、GEL)，将菌液加满；有下划线标记的(ADH、LDH、ODC、H2S、URE、)，加好菌悬液后，用无菌液体石蜡封口。 剩余的菌液可用于涂玻片、染色，接种于非选择性平板做次代培养。 盖好孵育盒盖，放置几分钟，观察每个微量杯都应呈阴性反应的颜色。 孵育盒放入37摄氏度温箱培养24小时。 API 20E反应结果阅读要领（１） 一、若GLU（葡萄糖）为阳性，则记录GLU的结果，在TDA、IND、VP孔中加入相应的附加试剂，1分钟内读取TDA、IND的结果，5—10分钟内读取VP的结果。同时读并记录取其它反应的结果，用生化鉴定结果组成一个7位数编码。 二、若GLU(葡萄糖)为阴性，但有多于2个的反应呈阳性，则按上述方法读取并记录结果。 三、若GLU（葡萄糖）为阴性（非发酵菌），且其它呈阳性的反应不多于2个，则不要加试剂，放回温箱中再培养 24 hr后按第一条的方法读取结果。同时用次代培养物接种2个API OF培养基证实葡萄糖代谢类型；接种1个API M培养基观察动力；划线接种MacConkey平板。培养24hr后将其结果记录到API 20E报告单，与生化鉴定结果一起得到一个9位数编码。 API 20E反应结果阅读要领（２） ONPG：淡黄色—黄色为阳性，无色为阴性。 ADH、LDC、ODC、URE以苯酚红为指示剂，橙色—红色为阳性，黄色为阴性。 CIT：管口处出现兰色为阳性，黄色—绿色为阴性。 H2S：黑色为阳性，无色—浅灰色为阴性。 TDA、IND、VP加试剂后出现红色为阳性,不出现红色为阴性。 GEL：黑色素扩散为阳性，不扩散为阴性。 GLU—ARA为糖类的酸化反应，指示剂溴百里香酚兰显黄色为阳性，蓝、绿色为阴性。 API 20E反应结果阅读要领（３） GLU为阴性时，记录其结果，并在GLU孔中按先后顺序分别加一滴NIT 1和NIT 2试剂，出现红色时 NO2为阳性，N2为阴性；不出现红色时，加少许Zn粉，此时出现红色，则NO2为阴性，N2为阳性。 有动力，MOB为阳性，无动力则为阴性。 麦康凯平板上生长，McC为阳性，不生长为阴性． OF培养管下部变色为发酵型，OF-F为阳性，下部不变色OF-F为阴性；OF培养管上部变色为发酵型，OF-O为阳性，上部不变色OF-O为阴性． API 20NE试剂条接种要点（1） 先做氧化酶试验，阳性者接种API 20NE。 塑料培养盒中加水5 ml,放入试剂条，记录标本资料。 取18—24hr菌龄的菌落，分散于２ml盐水（20040）中，使达0.5 MacFarland 浊度（A液）。 取A液200 ul(４－８滴），加入AUX培养液中，小心混匀避免产生气泡，制成同化试验接种液（B液）。 用A液按API 20E相同的方法接种生化试验杯孔（NO3－PNPG　其中，GLU，ADH,URE用液体石蜡封口） API 20NE试剂条接种要点（2） 用B液接种同化试验杯孔(下面有三条红线者）。使液面与杯口平齐．B液黏度很大，特别注意不要使菌悬液堵住杯口，形成大的气泡，影响反应结果。 严格无菌操作，避免空气中的杂菌污染同化试验． 剩余的A液可用于涂玻片、染色，接种于非选择性平板做次代培养。 盖好孵育盒盖，放置几分钟，观察每个微量杯都应呈阴性反应的颜色。 孵育盒放入30摄氏度温箱培养24小时。 API 20NE反应结果阅读要领（１） 一．生化试验： 不要打开塑料培养盒盖，先读取从GLU到PNPG的生化试验结果并记录之． 在NO3杯孔中按先后次序分别加入一滴NIT1和NIT2试剂，出现红色NO3为阳性．不出现红色时，加少许Zn粉，此时出现红色，则NO3为阴性，５分钟内不出现红色，则NO3阳性． TPR杯孔中加一滴James试剂，立即出现红色为阳性．不出现红色为阴性． 二．同化试验： 从杯口上方往下看，红线模糊或菌悬液变浑浊，表明有菌生长，为阳性．否则，为阴性． 偶有弱生长者可记录为－／＋或＋／－． API 20NE反应结果阅读要领（２） 三．在报告单上做出一个７位数编码，查编码手册或API LAB软件． 四．如果，查不到编码，或给出提示“IDENTIFICATION NOT VALID BEFORE 48-HR INCUBATION”,立即用液体石蜡将N