产耐热过氧化氢酶菌株的筛选与培养.PDFVIP

第 1O卷 第4期 2010年2月 科 学 技 术 与 工 程 V01．10 No．4 Feb．2010 1671—1815(2010)4-0868-06 ScienceTechnologyandEngineering @ 2010 Sci．Tech．Engng． 产耐热过氧化氢酶菌株的筛选和培养 刘灵芝 ， 常雁红 罗 炜 熊 莲 ， 肖宝清 罗 晖 (北京科技大学生物科学与技术系。，环境-E程系 ，北京 100083；江西中烟工业公司技术研发中心 ，南昌330096) 摘 要 过氧化氢酶能催化过氧化氢的分解，在食品、环保、纸浆和造纸业、以及纺织行业具有重要的工业应用价值。研究从 堆肥中分离了一株产过氧化氢酶的嗜热菌。该菌最适生长温度为55℃，最适生长pH值为7．0，最适NaC1浓度为 1．5％。通过 16SrDNA编码基因序列分析，该菌和环状芽孢杆菌有较高的同源性，命名为Bacillussp．SHT2。通过对培养基中的碳、氮源进 行优化，酶活达到 196．9U／mL。酶学性质研究表明该菌产生的过氧化氢酶具有 良好的热稳定性、pH稳定性和储存稳定性。 关键词 过氧化氢酶 嗜热菌 筛选 中图法分类号 Q814．2； 文献标志码 B 过氧化氢酶 (Catalases，CAT)广泛存在于好氧 场的需求，也是企业降低成本的需要。 微生物和动、植物体 内，是在生物演化过程中建立起 本文从高温环境中分离产耐热过氧化氢酶的菌 来的生物防御系统的关键酶之一，其生物学功能是 株，并对其菌株鉴定、培养条件和酶学性质进行了研究， 催化细胞内过氧化氢分解，防止氧化。目前，随着整 以期为耐热过氧化氢酶在工业 匕的应用奠定基础。 个人类社会对环境问题的关注，利用过氧化氢酶来 清除工艺过程和废水中的过氧化氢的生物净化工艺 1 材料和方法 将有广阔的推广和应用前景，因此过氧化氢酶在食 品、环保、纸浆和造纸业、以及纺织行业具有重要的 1．1 样品 工业应用价值 ¨ 。 从实验室堆肥半成品中取三种不同的样品，从 传统上过氧化氢酶的生产是从人或动、植物组 中分离产耐热过氧化氢酶的微生物菌株。 织中以及牛肝中提取的 ’ ，该方法受来源、季节、 1．2 培养基 原料 以及成本的限制，容易污染，热稳定性也较差， 菌种筛选和分离培养基 (g／L)；酵母粉5，蛋白 不能满足工艺要求。而用微生物法制备酶制剂具有 胨 10，NaC110，琼脂20。 生产来源范围广、容易培养、生产周期短、价格便宜、 基础发酵培养基(g／L)：蔗糖 l0，酵母粉5，牛肉 可大规模生产等优点 ，。而过氧化氢酶作为一种 膏 10，NaC110，KH2PO40．28，MgSO40．25，CaC12 具有重要应用价值的酶，尽管对其的研究已经持续 0．074，琼脂20，pH7．0。 了一个多世纪，但嗜热微生物过氧化氢酶的研究仍 1．3 产过氧化氢酶菌株的筛选方法 ． 然较少 ’ 。因此开发热稳定性的过氧化氢酶是市 分别称取不同材料样品1g，加入装有20mL无 菌水的 100mL三角瓶 中，摇床振荡摇匀 (200r／ 2009年 1O月26日收到 国家科技支撑计划项 目(2008BAD91B01)、 min、20min，45~C)，无菌操作下吸取液体