钙离子对木聚糖酶Xyn10A热稳定性影响.PDFVIP

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2017-06-16 发布于福建
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钙离子对木聚糖酶Xyn10A热稳定性影响.PDF

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－林业工程学报，２０１７，２（３）：７６８２ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ－ｄｏｉ：１０．１３３６０／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９６１３５９．２０１７．０３．０１３钙离子对木聚糖酶Ｘｙｎ１０Ａ热稳定性的影响陈秀霞，王亮亮，张瑜，李迅，王飞∗ （南京林业大学化学工程学院，江苏省林业资源高效加工利用协同创新中心，江苏省农林生物质资源化学利用国家重点实验室培育点，江苏省生物质绿色燃料与化学品重点实验室，南京２１００３７）摘　要：木聚糖酶广泛应用于食品、饲料、纺织、能源等领域。在生产过程中木聚糖酶的热稳定性较为重要，它直２＋接影响酶的反应温度及使用效率。添加Ｃａ能够显著提高来源于ＴｈｅｒｍｏｔｏｇａｔｈｅｒｍａｒｕｍＤＳＭ５０６９的木聚糖酶２＋Ｘｙｎ１０Ａ在高温（８５℃）条件下的热稳定性。为解析Ｘｙｎ１０Ａ酶蛋白中的Ｃａ结合区域及热稳定性机制，笔者采用蛋白质结构模拟和定点突变技术以确定该结合区域，并分析其对于酶热稳定性的影响机制。酶蛋白的建模和结构比对结果表明，ＧＨ１０家族木聚糖酶的结构保守性远大于其序列保守性；木聚糖酶Ｘｙｎ１０Ａ中局部环区７１２７２４２＋２＋（ＩＹＲＤＮＡＴＫＹＥＩＰＰ）涉及Ｃａ的结合功能，同时其热稳定性依赖于该环区与Ｃａ之间的亲和力。对该环区２＋２＋７１２７２４的定点突变和删除突变导致Ｘｙｎ１０Ａ无法有效地结合Ｃａ。Ｃａ可与酶蛋白中的（ＩＹＲＤＮＡＴＫＹＥＩＰＰ）环区形成配位键，显著降低Ｘｙｎ１０Ａ酶催化结构域的柔性和自由度，使Ｘｙｎ１０Ａ酶能够在高温下保持优良的热稳定性，进而有效地发挥其高温催化水解木聚糖的能力。２＋关键词：嗜热木聚糖酶；Ｃａ结合区域；热稳定性；结构模拟；定点突变－－－中图分类号：Ｑ７１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：２０９６１３５９（２０１７）０３００７６０７２＋ＥｆｆｅｃｔｏｆＣａｏｎｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｘｙｌａｎａｓｅＸｙｎ１０ＡＣＨＥＮＸｉｕｘｉａ，ＷＡＮＧＬｉａｎｇｌｉａｎｇ，ＺＨＡＮＧＹｕ，ＬＩＸｕｎ，ＷＡＮＧＦｅｉ∗ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＪｉａｎｇｓｕＣｏ⁃ＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｏｆＥｆｆｉｃｉｅｎｔＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＦｏｒｅｓｔＲｅｓｏｕｒｃｅｓ；ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙＣｕｌｔｉｖａｔｉｏｎＢａｓｅｆｏｒＣｈｅｍｉｃａｌＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａ