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高效毛细管电泳仪的使用与维护 兰作平 2014-3-25 基本原理 毛细管电泳(CE)又称高效毛细管电泳(HPCE),是指离子或带电粒子以毛细管为分离室,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。 特 点 1.仪器简单、易自动化 电源、毛细管、检测器、检测池 2.分析速度快、分离效率高 在3.1min内分离36种无机及有机阴离子，4.1min内分离了24种阳离子；分离柱效：105～107万/m理论塔板数； 3.操作方便、消耗少 进样量极少，水介质中进行； 4.应用范围极广 有机物、无机物、生物、中性分子；生物大分子等； 分子生物学、医学、药学、化学、环境保护、材料等； 分离原理 CL1020 高效毛细管电泳仪 仪器组成 CL101A 高压电源 CL1020 紫外检测器 CT 数据采集及处理工作站 毛细管电泳检测池 主要技术参数 1. 进样 液体压力差进样 50-100mm 2. 冲洗方式 弹簧助推正压冲洗 3. 毛细管 石英毛细管，长度50-100cm，内径为25-75um 4. 检测器波长范围 190-700nm 5.输出电压 0-30kv，连续可调 仪器运行环境要求 1. 工作环境干燥，温度变化小，30℃，8 小时内温差波动不超过3℃（推荐在装有空调的环境中）。 2. 环境湿度不大于80% 3. 测量过程中仪器不要摇动 4. 接通电源，仪器预热30分钟 5. 工作电流不要长时间超过150 微安，因为过高的电流会是毛细管内的径向温度梯度增加，使样品分离度降低。 毛细管的清洗与维护 新毛细管使用：使用前分别用1mol/L、1mol/LNaOH、水、及缓冲液冲洗毛细管30分钟。 如果仪器长时间不用（多于一个星期），清洗后用空气吹毛细管20 分钟，并放于干燥环境下保存。方法如下：清洗试剂吸入5ml 注射器中，将注射器插入清洗器的固定孔中，用针头将毛细管引过清洗器接口的橡皮垫，连接于注射器出口上，移动清洗器手柄使清洗器顶块压在注射器推杆上即可进行毛细管冲洗。若是毛细管直接通过清洗器接口的橡皮垫必须将毛细管口截去1mm，以避免发生堵塞现象。 检测窗口：选择毛细管电泳流通池，使用开窗器夹在距离毛细管出口9～10 cm 处，用打火机将此处毛细管表面的聚酰亚胺烧去，并用擦镜纸沾丙酮除去余炭，同时将毛细管外部灰尘擦净，自下而上穿入毛细管流通池，将毛细管窗口部位固定在流通池窗口，注意应将流通池上部螺钉拧紧至毛细管不能上下移动，而下部螺钉不能拧紧！将检测流通池装在检测器上，用专用螺钉固定。 检测池放入主机箱正面检测池座中，在缓冲溶液瓶中加入新配制好的缓冲溶 液,将电极和毛细管的两端浸在缓冲溶液中,保持毛细管两端出口在同一水平面 上，且毛细管内必须充满缓冲溶液,关好仪器正门,确认仪器各部分连接正确后,按 动高压启动按钮,如果发生异常应立即按动高压关断钮,检查并排除故障后,再重 新加压。 根据实验需要设定仪器工作参数，见下述高压电源及各检测器操作说明。 流体压差进样：将样品瓶放在高度进样架上，根据需要调整进样高度 实验结束后关闭电源，用蒸馏水冲洗毛细管30 分钟，或将缓冲溶液保持在毛 细管中即将毛细管至于压力清洗装置中。 仪器各组件操作说明 高压电源 CL 101A 高压电源是为高效毛细管电泳仪提供高压直流电场驱动力的直流电源设备。电压输出连续可调 紫外检测器 常见故障及说明 半胱氨酸高效毛细管电泳实验 样 品： 半胱氨酸 缓冲溶液(buffer)： 10 mmol/L NaH2PO4-Na2HPO4 1:1缓冲溶液(NaH2PO4和Na2HPO4各5mMol/L)，pH10.6. 0.1mol/L NaOH溶液，二次去离子水。 步 骤 仪器的预热和毛细管的冲洗：打开仪器和配套的工作站。工作温度设置为30℃，不加电压，冲洗新毛细管，顺序依次是：1 mol/L HCl溶液30 min二次水5 min ，1 mol/L NaOH溶液30 min，二次水5 min，10 mmol/L NaH2PO4-Na2HPO4 1:1缓冲溶液5 min，两次运行之间依次用0.1 mol/L NaOH 2min, 二次水2 min, 缓冲液5min。 样品测定 液体压力差进样，进样压力50 mbar，进样时间20s。然后开始分析，电压30 kV。 注意事项 1. 冲洗毛细管时禁止在毛细管上加电压；不允许更改讲义上给定的工作电压，也不建议改变进样时间。 2