谷氨酸发酵机制要领.pptVIP

第三节 在谷氨酸发酵中怎样控制细胞膜的渗透性 在谷氨酸发酵的过程中，关键之一在于发酵培养期间谷氨酸生产菌的细胞膜的结构与功能上的特异性变化，使细胞膜转变成有利于谷氨酸向膜外渗透的式样，即完成谷氨酸非积累型细胞向谷氨酸积累型细胞的转变。这样，由于终产物谷氨酸不断的排出细胞外，使细胞内的谷氨酸不能积累到引起反馈调节的浓度。 引言 第一、控制细胞膜的渗透性的方法 通过控制发酵培养基中的化学成分，达到控制磷脂、细胞膜的形成、或者阻碍细胞壁的正常的生物合成，使谷氨酸生产菌处于异常的生理状态，以解除细胞对谷氨酸向胞漏出的渗透屏障。 ※一、控制磷脂的合成，导致形成磷脂合成不足的不完全的细胞膜 ※ a、生物素缺陷型（使用生物素缺陷型菌种进行生产的时候，必须控制生物素的用量） 1．作用机制 生物素作为催化脂肪酸生物合成最初反应的关键酶乙酰辅酶A羧化酶的辅酶，参与了脂肪酸的合成，进而影响磷脂的合成。 当磷脂合成减少到正常量的1/2左右时，细胞变形，谷氨酸向膜外漏出，积累于发酵液中。 2．控制的关键 为了形成有利于谷氨酸向外渗透的磷脂合成不足的细胞膜，必须亚适量控制生物素（5－10微克/升）发酵初期（0－8小时），菌体正常生长，菌体形态为单个、成对、八字形、棒状、椭圆，短杆形。当生物素耗尽后，在菌体的再次倍增期间，开始出现异常形态的细胞，菌体伸长、膨大乃至不规则形，边缘有褶皱。完成谷氨酸非积累型细胞向谷氨酸积累型细胞的转变。 如果生物素过剩，就会出现只是长菌而不产酸的现象或者长菌好而产酸低。 ※ b．添加表面活性剂（吐温60）或者饱和脂肪酸 使用生物素过量的糖蜜原料发酵生产谷氨酸时，通过添加表面活性剂或者高级饱和脂肪酸（C16-18）及其亲水聚醇酯类，同样能清除渗透屏障物，积累谷氨酸。 1．作用机制 表面活性剂和饱和脂肪酸的作用，并不是在于他的表面效果，而是在不饱和脂肪酸的合成过程中，作为抗代谢物具有抑制作用，对生物素有拮抗作用。通过拮抗生物素的生物合成，导致磷脂合成不足，结果形成磷脂不足的细胞膜。提高了细胞膜对脂肪酸的渗透性。 2．影响产酸的关键 必须控制好添加表面活性剂、不饱和脂肪酸的时间与浓度，必须在药剂添加之后，在这些药剂存在下，再次进行菌的分裂增值。形成处于异常生理状态的产酸型细胞，即完成谷氨酸非积累型细胞向谷氨酸积累型细胞的转变。 例如：以甜菜糖蜜为原料，采用高生物素、高吐温的工艺，一般发酵对数生长期的早期（4－6小时），添加0.2％吐温60后OD值与菌体重约净增一倍。剩余生长太多，意味着谷氨酸生产菌的细胞不能完成有效的进行生理学变化；剩余生长不足，意味着谷氨酸生产菌没有机会完成这种转变。 ※ C.油酸缺陷型 使用油酸缺陷型菌株进行谷氨酸发酵时，必须限制发酵培养基中油酸的浓度 1、作用机制 由于油酸缺陷型突变株切断了油酸的后期合成，丧失了自身合成油酸的能力；即丧失了脂肪酸生物合成的能力，必须由外界供给油酸，才能生长。故油酸的多少，直接影响到磷脂合成量的多少和细胞膜的渗透性。通过控制油酸，使磷脂合成量减少到正常量的1/2左右时，细胞变形，谷氨酸分泌积累于培养液中。 2．控制的关键 对油酸缺陷型突变株的谷氨酸生产力来说，最重要的因子是细胞内的油酸含量，必须控制油酸亚适量，而细胞内生物素、棕榈酸等饱和脂肪酸的含量多少却影响甚微。若油酸过量时，只长菌不产酸，或者长菌好而产酸低，只有在油酸亚适量的情况下，当油酸耗尽之后，谷氨酸菌经再度倍增，发生细胞膜结构与功能上的特异性变化，除去谷氨酸向膜外渗透的障碍物，谷氨酸才能高产。 ※ d．甘油缺陷型 使用甘油缺陷型菌株进行谷氨酸发酵时，必须限制发酵培养基终甘油的浓度 1．作用机制 甘油缺陷型的菌株丧失? -磷酸甘油脱氢酶，即丧失L-甘油3磷酸NADP氧化还原酶。所以必能合成? -磷酸甘油和磷脂，必须由外界供给甘油才能生长。在甘油限量供应下，由于控制了细胞膜中与渗透性直接关系的磷脂含量，使谷氨酸得以积累。 2．控制的关键 使用甘油缺陷型菌株进行谷氨酸发酵的生产时，为了高产谷氨酸，必须控制添加亚适量的甘油或甘油衍生物。这样，不管是用醋酸,还是糖质原料，不管添加还是不添加生物素、油酸、硫氨素等物质，都能高产谷氨酸。这是由甘油缺陷型所控制的位置决定的。细胞内的磷脂可以由添加甘油的数量来调节，添加甘油过少，菌株生长不好，数量不够，周期长。甘油过量，磷脂合成正常，只长菌不产酸，或者长菌好产酸低；只有亚适量的控制甘油的时候，开始菌体正常生长，当甘油耗尽后，通过再度增殖，细胞变形。细胞磷脂的含量变为亲株的一半。压榨细胞的体积变小，从而破坏了细胞膜对谷氨酸的渗透屏障，使谷氨酸向膜外渗漏。 ※二、阻碍谷氨酸菌细胞壁的合成，形成不完全的细胞壁，进而导致形成不完全的细胞膜 例如，在发酵对数生长期的早期，