急性眼刺激性试验SOP指南.docVIP

急性眼刺激试验标准操作规程 目的：确定评价化学品对哺乳类动物眼睛是否有刺激作用及其程度。 概述：受试样品以一次剂量加入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照；在规定的时限内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试样品对眼睛的刺激作用。观察时间赢能足以评价刺激效应的可逆性和不可逆性。观察时间最少72小时，但是一般不超过21天；当动物出现严重和持久的痛苦迹象是，以适当的方式将动物处死；强酸物质或强碱物质，由于其可预见的腐蚀特性，不必做本实验；已在皮肤试验中证实具有腐蚀或严重刺激毒性的物质不必进行眼刺激试验；在充分并公认的体外试验结果中确定可能产生刺激性或腐蚀性的物质不必进行体内试验。 1；样品处理 液态受试样品，一般不需要稀释，可直接使用。不溶性或难溶固体或颗粒状物质，应 其研磨成细粉状，过74微米孔径筛。气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。对挥发性物质，剂量可以通过使用前后称量容器质量进行估值。 2；实验动物：成年白兔，2000克到3000克 可预见有严重反应的受试样品，先考虑用一只动物试验，结果有反应，则不必进行，不反应则，至少需要3只动物。 3；剂量设计；液态受试样品染毒量为0.1ML。若受试样品为固态难溶颗粒状，染毒量应为100MG。 4；试验步骤 试验前眼睛的检查 试验前动物药在动物实验室环境中至少适应3天。试验前24小时，要对实验动物的两只眼睛进行常规检查。有眼睛刺激症状，角膜缺陷或结膜损伤的动物不能用于试验。 染毒；轻轻拉开实验动物一侧眼睛的下眼睑，将受试样品0.1ml（或100mg）滴入结膜囊中，使上，下眼被动闭合一秒，以防止受试样品丢失。未处理的另一侧眼睛作为自身对照。 滴入受试样品24小时内不冲洗眼睛，如果认为必要，在24小时可进行冲洗。 根据表2的评价标准，如果受试样品出现中度以上刺激性时，必需时另选3只动物进行冲洗试验，滴入受试样品闭合一秒，30秒后用生理盐水冲洗5分钟，水的流量和流速都不应导致眼损伤。 5；观察及评分 观察时间最少72小时，但应足以评估观察到可逆或不可逆效应。观察时间一般不超过21天。 临床检查和评分； 在滴入受试样品后的第一小时，24小时，48小时，72小时对眼睛进行检测，如果72小时为出现刺激反应，可终止试验。如果发现累及角膜或有其他眼刺激作用，7天内不恢复者为确定该损害的可逆性或不可逆性需延长观察时间，一般不超过21天。观察和记录结束后，可使用荧光素钠对所有动物的眼睛做进一步检查。在每次检查中均应按表1记录眼的刺激反应，并按表2进行眼刺激评价。 观察进行时，可使用放大镜及裂隙灯。 表1眼各部位损伤评分表 损伤情况 评分 角膜 O浑浊程度（以最字谜部位为准） 无浑浊 0 散在或弥漫性浑浊，虹膜清晰可见 1 半透明区，虹膜轻度模糊不清 2 出现灰白色半透明区，虹膜模糊不清，瞳孔大小勉强可见 3 角膜浑浊，虹膜无法辨认 4 A 角膜受损范围（出现任何浑浊的总面积） 小于1/4 1 1/4-1/2 2 1/2-3/4 3 3/4-1 4 角膜损伤加权积分=O*A*5 最高积分为80 虹膜 I虹膜损伤 正常 0 皱褶明显加深，充血，水肿，角膜周围有充血（出现任何一项或任何两项）对光反应迟钝。 1 对光反应消失，出血，肉眼可见严重损伤（出现其中一项或全部） 2 虹膜损伤加权积分=I*5最高积分为10 结膜 R充血（指睑结合膜和球结膜 血管正常 0 血管充血，呈鲜红色 1 血管充血，呈深红色，个别血管难以辨认 2 弥漫性充血，呈深紫红色 3 S水肿 无水肿 0 轻微水肿伴部分眼睑外翻 1 明显水肿伴部分眼睑外翻 2 水肿至眼睑近半闭合 3 水肿至眼睑超过半闭合 4 D分泌物 无 0 少量分泌物（不包括动物内眦少量分泌物） 1 分泌物使整个眼区潮湿或粘着 2 分泌物使整个眼区潮湿或粘着 3 结膜损伤加权积分=（R+S+D）*2最高积分为20 角膜，虹膜和结膜反应累加最高积分为110 表2 眼刺激强度评价标准 染毒后4天内最高总积分平均值 刺激反应持续时间（总积分平均值） 刺激强度 0- 第一天≥0 无 2.5- 第二天≥0 轻 15- 第四天=0 轻 第四天＞0 中 25- 第七天≤20，半数以上动物第七天≤10 中 第七天≤20，半数以上动物第七天＞10，但是无任何一只动物第七天＞30 中 第七天≤20，半数以上动物第七天＞10，而且有一只动物第七天＞30 重 第七天＞0 重 50- 重