清除氧自由基.docVIP

超氧负离子 黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统产生超氧负离子产生超氧负离子 黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、 清除超氧自由基负离子O2- 徐艳,曲婷婷. 甘草消除氧自由基的体外研究[J]. 食品研究与开发,2006,(8).2HPO4- NaH2PO4缓冲液 a 称取 Na2HPO4·12H2O( MW=358.14) 3.581 4 g 于100 mL 小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入 100 mL容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。 b 称取 NaH2PO4·2H2O(MW=156.01)0.780 g 于 50 mL小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入 50 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。 c 量取 91.5 mL a 液与 8.5 mL b 液混合后, 该液即为0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液。 d 称取 L- Met( MW=149.2) 0.194 1 g 于 50 mL 小烧杯中, 用少量 0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液溶解后, 移入 50 mL 容量瓶中, 用 0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液定容至刻度。 1.2.2.2 NBT( 氯化硝基四氮唑蓝) 的配制(7.5×10-4mol/L) 称取 NBT( MW=817.7) 0.061 3 g 于 50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解后, 移入 100 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。 1.2.2.3 核黄素溶液(2×10-5 mol/L) a.称取 EDTA( MW=292) 0.002 92 g 于 50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。 b.称取核黄素( MW=376.36) 0.073 5 g 于 50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。 合并 a 液和 b 液, 移入 100 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度( EDTA0.1 mmol,核黄素 2 mmol)。贮于冰箱中, 避光保存, 用时稀释 100 倍。 1.2.3 甘草提取物溶液的配制 1.2.3.1 甘草酸溶液的配制 称取甘草酸 0.05 g 用少量稀醇 (10 %乙醇溶液)溶解后, 移入 50 mL 容量瓶中, 用稀乙醇定容至刻度, 即为 1 g/ mL 的甘草酸溶液。 1.2.3.2 甘草次酸溶液的配制 称取甘草次酸 0.05 g 用少量稀醇 (10 %乙醇溶液)溶解后, 移入 50 mL 容量瓶中, 用稀乙醇定容至刻度,即为 1 g/mL 的甘草次酸溶液。 1.2.3.3 甘草总黄酮组溶液的配制 称取甘草总黄酮 0.1 g 用少量稀碱液 ( 0.01 mol/LNaOH 溶液) 溶解后, 移入 100 mL 容量瓶中, 用稀碱液定容至刻度, 即为 1 g/L 的甘草总黄酮碱溶液。( 甘草总黄酮全部溶解) 1.2.4 NBT 光还原法消除氧自由基原理 核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O2-, 当加入 NBT 后, 在光照条件下, 与超氧自由基反应生成单甲月替( 黄色) , 既而还原成二甲月替( 呈兰色) 。该产物在 560 nm 下有最大吸收峰。当加入抗氧化剂1.2.5 甘草消除氧自由基活性测定 1.2.5.1 对照组吸光度的测定 取 3 个微烧杯, 编好号后, 以反应系统总体积为3.0mL计算, 按表 1 加入各试剂。试剂加入后充分混匀,取 0 号微烧杯放入暗处作空白( 调零时用) , 在 560 nm波长下测定光密度。 1.2.5.2 各组提取物活性的测定 以反应系统总体积为 3.0 mL 计算, 按表 2 加入每组试剂和提取液量。在 560 nm 波长下测定光密度, 以1, 2 号杯的 A 值为对照计算出不同提取物溶液是否抑制 NBT 的光还原反应, 及具有抑制作用的提取物在其反应系统中抑制 NBT 光还原的相关百分率。然后以所加提取物溶液量为横坐标, 以抑制百分率为纵坐标作图, 画出两者的相关曲线, 找出 50 %抑制率的各溶液的量, 此提取物溶液量即为该物质一个活力单位 清除·OH 丛媛媛. 新疆胀果甘草多糖的分离纯化、结构分析和生物活性研究[D]. 新疆医科大学: 新疆医科大学,2008.2O2与 Fe2+混合产生·OH 在体系内加入水杨酸捕捉·OH 并产生有色物质，该物质在 510nm 下有最大吸收。 反应体系中含 9.8mmol/L H2O2 2mL，9mmol/LFeSO4 2mL，9mmol/L 水杨酸-乙醇2mL，不同浓度的甘草多糖溶液 2mL。 最后加 H2O2启动反应，37℃反应 30min; 以超纯水为参比，在 510nm 下测量各浓度的吸光度。 考虑到多糖本身的光值，以9mmol/L FeSO4 2mL，9mmol/L 水杨酸-乙醇 2mL，不同浓度的多糖溶液 2mL 和 2mL超纯水作为多糖的本底吸收