基因工程操作程序(后3步).pptVIP

2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）程序： * 二、基因表达载体的构建 1、为什么要构建基因表达载体？ 2、基因表达载体要包括那些结构与运载体是不是一个意思? （请阅读P11结合课本插图思考下列问题） 3、启动子、终止子和标记基因，在基因表达载体中有何作用? 4、在表达载体的构建过程中用到了哪些工具酶？ 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 二、基因表达载体的构建——基因工程的核心 目的： 载体与表达载体的区别： 二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 2.用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 二 基因表达载体的构建 —— 核心 3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 质粒 DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） —— 核心 同一种 (二)基因表达载体的构建 4.过程: 三、将目的基因导入受体细胞 1、什么是转化？ 2、针对不同的受体细胞，常见的转化方法都有哪些？ 3、将目的基因导入细胞的具体过程是怎样的？ 阅读课本P12-13相关内容，思考下列问题 (三)将目的基因导入受体细胞 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态法 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 1、将目的基因导入植物细胞的方法： 农杆菌转化法适用于： (三)将目的基因导入受体细胞 目的基因获取 目的基因与农杆菌Ti质粒结合 导入农杆菌细胞 导入植物细胞 目的基因整合到植物细胞染色体上，随染色体复制并表达一定性状 双子叶植物 (三)将目的基因导入受体细胞 3、将目的基因导入微生物细胞 （1）原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 （2）方法： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 分子 水平 个体水平— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交（注意与上不同之处） 抗原抗体杂交 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 ①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再与同位素标记的DNA探针杂交；②抗原－抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的。 完成导学案第6题 结合导学案P2相关内容，注意以下两点 获取目的基因 2. 构建基因表达载体 3.将目的基因导入受体细胞 4.目的基因的检测与鉴定 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 目的基因、启动子、终止子、标记基因 农杆菌转化法、显微注射法、 检测：是否插入、转录、翻译 归纳: 基因工程的基本操作程序 1）有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D 练习 *