实验四SDS-PAGE电泳1.pptVIP

实验四 蛋白质分子量的测定 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法 聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE ）是根据被分离物质所带的电荷多少及其分子大小、形状的不同，在电场的作用下，产生不同的移动速度而分离的方法。它具有电泳和分子筛的双重作用。 二、凝胶的原理 聚丙烯酰胺（Acr）单体和交联剂 N ， N –亚甲基双丙烯酰胺（Bis 在催化剂的作用下聚合成含有酰胺基侧链的脂肪族长链。相邻的两个链通过亚甲基桥交联起来就形成三维网状结构的聚丙烯酰胺凝胶。 双丙烯酸铵决定交联形成的程度，丙烯酰胺决定决定交联的长度 常用的催化剂（包括催化剂和加速剂） （1）过硫酸铵 (AP) – TEMED （四甲基乙二胺）系统 （ 2 ）核黄素– TEMED 系统 这是一个光激发的催化反应。核黄素在光照下分解，被还原成无色型，但在有氧条件下，无色型又被氧化成有游离基的黄素环，使聚合作用开始。 凝胶的浓度： 常用的所谓标准胶是指浓度为 7.5 ％的凝胶，大多数生物体内的蛋白质在此胶中电泳都能得到满意的结果。当分析一个未知样品时，常常先用 7.5 ％的标准凝胶或用4％～ 10％的凝胶梯度来试测，选出适宜的凝胶浓度。 三、 所用试剂： Acr（acrylamide）/Bis 储备液 10% (w/v) SDS ： TEMED(四甲基乙二胺) 过硫酸铵 (AP):10%现配现用 Tris－HCL缓冲系统，