垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注后诱导性一氧化氮合酶表达的影响论文.docVIP

　　垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注后诱导性一氧化氮合酶表达的影响论文 【摘要】 目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注时氧化氮合酶（iNOS）在PACAP脑保护机制中的作用。方法 采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型，对36只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和PACAP组，在大鼠脑缺血2h后进行24h、48h再灌注，应用免疫组化法检测脑组织iNOS的表达。结果 脑缺血再灌注后，与假手术组比较，iNOS的表达量显著增加，阳性细胞数分别为60.02±4.23、80.36±6.24，P 0.01；应用PACAP后与缺血再灌注组比较.freeliareperfusion Lu ethods Thirtysix SD rats ly divided into 3 equal groups: sham operation group undergoing sham operation; ischemia/reperfusion(I/R) group undergoing thread embolism of the left middle cerebral artery occlusion(MCAO) to cause focal ischemia for 2 hours and then undergoing reperfusion; and PACAP group undergoing peritoneal injection of PACAP half hour after the ischemiareperfusion of MCAO. Then the rats in the 3 groups munohistochemistry ic cortexes operation group(P 0.01)，and iareperfusion ay be one of the mechanisms of its neuroprotective function. 【Key iareperfusion；iNOS 研究表明,在脑缺血再灌注损伤过程中,NO的生成是重要的发病环节,引起细胞死亡或凋亡。NOS活性间接反映NO的生成能力。垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）具有神经营养、神经保护作用。其能否抑制缺血再灌注后iNOS的表达，目前国内外尚无动物试验的文献报道。为此，本研究建立大鼠脑缺血再灌注模型，探讨iNOS在PACAP 脑保护机制中的作用。 1 材料与方法 1.1 实验动物及分组 健康SD大鼠36只，体质量（300±20）g，采用随即数值表分为假手术组、缺血再灌注组、PACAP组，每组12只。各组根据不同时间点又分为缺血2h 再灌注24h、48h组，每小组各6只大鼠。 1.2 局灶性脑缺血再灌注模型的制作 用Koizumi线栓法［1］，建立大鼠局灶性脑缺血模型。以10%水合氯醛（300mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠后，仰卧固定，分离并暴露左侧颈总及颈内、外动脉。结扎翼腭动脉，将栓线从颈外动脉至颈内动脉，插入左侧大脑中动脉（MCA），遇阻即止，线栓前端颈内动脉起始处约（18.5±1.0）mm，阻断该侧MCA的血流供应。假手术组线栓深度为10mm。模型成功的大鼠在缺血2h后拔线至颈外动脉残端内进行再灌注。PACAP组于再灌注30min内，由微动脉注射，1×109mol/kg，1次/d。假手术组和脑缺血再灌注组，用等体积NS代替PACAP。 1.3 脑组织石蜡切片的制备 各组大鼠分别于再灌注12、24h用10%水合氯醛过量麻醉，开胸暴露心脏，经左心室主动脉插管，先快速灌注37℃NS，随后灌注4%的多聚甲醛固定液0.01ml/l,开颅取脑，于视交叉前后2mm处，将脑连续冠状切片，厚度为4mm,常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切成3μm厚的连续冠状石蜡切片。 1.4 免疫组织化学染色 一抗iNOS购自北京中衫生物试剂公司，PACAP购自美国Sigma公司。3、3ˊ二氨基联苯胺（DAB）购自北京中衫公司。石蜡切片经常规脱蜡、水化、滴加一抗体后，按试剂盒说明书常规SP法对切片标本进行染色、DAB显色、蒸馏水洗、脱水、透明、封片。阳性染色为胞浆棕色颗粒。阴性对照以PBS代替一抗，余步骤同上。 1.5 参考Longa 5分制评分标准［2］对其进行首次神经功能评分:0分,无神经损伤症状;1分,.freele)基团上的铁离子结合,激活鸟苷酸环化酶(GC)产生作用,还可能通过与细胞中含铁硫中心的酶结合,使之失活,直接影响细胞的呼吸,抑制能量的生成。(3)当缺血脑组织再灌注时,氧大量进入脑细胞,随即生成大量的超氧阴离子,NO与之反应生成另一种强氧化自由基过氧亚硝基化合物(ONOO)，并降解为羟自由基和二