库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究论文.docVIP

　　库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究论文 肖凤霞，邓少东，田青，邓超明1，周改莲 【摘要】 目的 建立库仑阵列电化学高效液相色谱法快速测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质的含量。方法 采用库仑阵列电化学检测器检测去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)、5羟吲哚乙酸(5HIAA)，采用Phenomenex C18反相色谱柱(150 mm×4.60 mm，5 μm)，流动相为缓冲液乙腈(体积比87∶13).freelL·min-1，柱温为35 ℃。结果 4种单胺类神经递质的最低检测限为0.015 15～0.018 15 ng ,回收率为85.3 %～100.5 %。结论 该法具有快速、准确、灵敏、样品制备简便等优点，可用于大鼠脑组织中单胺类神经递质的分离检测。 【关键词】 高效液相色谱法;单胺类神经递质;库仑阵列电化学检测器 (1.School of TCM,Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou Guangdong 510006,China; 2.Taishan Medical University,Taian,Shandong 271016,China)Abstract:Objective To establish a rapid method for determining monoamine neurotransmitters in rats’ brain tissue by HPLC ed on a Phenomenex C18 column(150×4.60 mm,5 micron). The mobile phase,consisted of acetonitrileL·min-1. The column temperature ined.Results The minimum measurement limit ethod is rapid,.freelining the monoamine neurotransmitters in rats’ brain tissue. Key onoamine neurotransmitters; coularray detector 单胺类物质包括去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)、五羟吲哚乙酸(5HIAA)等物质，是哺乳动物和人类中枢神经重要的信息传递物质。研究该类物质及其代谢产物在体内的含量变化，对于阐明药物在体内的作用机制，提供了有力的依据。尤其在老年痴呆症、抑郁症、儿童多动症、儿童多动秽语综合征等疾病与神经递质含量关系、药物治疗效果等方面的研究中，可提供非常有用的信息1。目前文献报道此类物质常见的检测方法主要有高效液相色谱电化学检测器测定法(HPLCECD)、荧光法、放射酶学分析法等2。其中以HPLCECD测定法报道的较多，但现有的HPLCECD测定法存在流动相成分复杂3、重现性差、检测时间长、样品前处理不彻底等问题。本研究改进了现有的测定方法，建立起一种流动相单一、重现性好、检测时间短、样品处理完全,并可同时测定4种单胺类物质及其代谢产物的检测方法。 1 仪器与试药 1.1 仪器 库仑阵列电化学高效液相色谱仪Model 5600A16通道检测器(美国ESA公司)，Model 582 solvent Delivery System，Model 542 自动进样器，Coularrayo D37520型高速冷冻离心机(德国Heraeus公司);pHS25型pH计(上海精密科学仪器有限公司);GenPure超纯水系统(德国TKA公司);KQ500型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率500 enex，150 mm×4.60 mm，5 μm)，Alltima C18预柱(Alltech,7.5 mm×4.6 mm，5 μm);流动相：缓冲液每1 L超纯水中含乙二胺四乙酸二钠(EDTA)37.2 mg、NaH2PO4 31.2 g、辛烷磺酸钠1 g，pH值4.0∶乙腈=87∶13，流速：1 mL·min-1;柱温箱：35 ℃;自动进样器温度：4 ℃;检测电压：350 mV;进样量：15 μL。 2.2 溶液的制备 2.2.1 蛋白沉淀工作液的制备 取HCLO4 4.29 mL，加水稀释至500 mL，得到0.1 mol·L-1 HCLO4溶液，用0.22 μm滤膜滤过，即得。 2.2.2 混合对照品贮备液的制备 精密称取NE、DA、5HT、5HIAA对照品各1 000 μg，用0.1 mol·L-1 HCLO4定容至2 mL容量瓶中，使其质量浓度均为500 μg·mL-1。取以上