酶联免疫(ELISA)法测定水产品中氯霉素残留量.pdfVIP

维普资讯 福建水产，2004年 12月第4期 N0．4 JOURNALOFFUJIAN FISHERIES Dec．25．2O04 酶联免疫 (ELISA)法测定水产品中氯霉素残留量 黄冬梅，蔡友琼 ，毕士川，沈晓盛 (中国水产科学研究院东海水产研究所，上海 200090) 摘要：建立水产品中氯霉素残留量的酶联免疫检测方法。比较不同样品处理方法对检测结果的影响， 通过对检测范围、精密度、回收率等项 目的测定，验证了方法的可靠性。氯霉素标准在0．05ng／ml一 4．05ng／ml范围内具有良好的线性，板问变异系数小于 16．4％，样品测定的变异系数为9．4％ 一13．8％ ，乙 腈水提取方法的回收率在 84％一116％之问。 关键词：ELISA法；水产品；氯霉素 氯霉素 (chl0ramphenic0l，简称CAP)是第 抗体结合的氯霉素酶标记物也因此被保留在微孑L 一 个全化学人工合成的抗生素，由于其价廉及优 中，没有被结合的氯霉素酶标记物和未固相化的 良的抗菌：I生、稳定的药性，曾在一段时间内作为 物质在洗涤步骤中被去除。将酶基质和发色剂加 饲料添加剂和细菌性疾病的治疗用药，特别是在 入微孑L中孵育，氯霉素酶标 ’|己物将无色的发色剂 水产品中，使用范围较广。但氯霉素具有毒性， 催化为蓝色的产物，加人反应终止液可使颜色由 易引起人体血中毒，导致不可逆的再生障碍性贫 蓝变黄，在 450nm处测量吸光度值。样品中的 血。因此，我国政府规定禁止在渔牧养殖中使用 氯霉素浓度与吸光度值成反比。 氯霉素，并加强了对动物源性食品中氯霉素残留 的检测力度。 2 实验部分 目前公布的氯霉素检测技术方法有微生物 法、放射免疫法、气相色谱法 (GC) J、液相 2．1 仪器与试剂 色谱法(HPLC) 。‘’、质谱分析 等，这些方法 BIOT·EKELX800型酶标仪 (美 国 BIO．TEK 各有优劣。酶联免疫法 (ELISA)E2]具有特异性 公司)，配有 Kcjuniour数据分析软件，TDL一 强、灵敏度高，样品预处理简单等优点，且不需 60B型离心机，氮吹仪，均质器，旋转蒸发仪。 要复杂的仪器设备，能在短短的几小时内检测几 乙酸乙酯，乙腈，正己烷 (以上试剂均为色 十个到上百个样品，非常适合大批量样品的检测 谱纯，美国 Sigma公司)，三氯 甲烷、异辛烷， 工作。 0．5mol／L氯化钠 (以上试剂均为分析纯 ，上海试 剂 厂 )。RIDASCREEN Chloramphenicol试 剂 盒 1 基本原理 (德国r．Biopharm公司)，其 中包括 CAP标准溶 液、酶标记物、抗体、基质、发色剂、反应停止 ELISA测定的基础是竞争性酶联免疫抗原抗 液和缓冲液。 体反应，所有的免疫反应都在微孑L中进行。当加 2．2 样品处理 入氯霉素酶标记物、标准或样液、抗体 (兔 IgG 2．2．1 乙腈 一水提取方法 即兔抗氯霉素的抗体)后，游离氯霉素和酶标记 精确称取 5．0g经粉碎后的样 品至 50ml具 物相互竞争氯霉素抗体的结合位点。由于微孑L板 塞离心管中，加入 15ml乙腈水溶