专题四受体的机制与新药设计.pptVIP

专题四、受体机制与新药设计 第一节 受体药物的筛选 第二节 受体药物的设计 第一节 受体药物的筛选 一、受体药物体外筛选的放射配基结合分 析 二、竞争结合反应和饱和结合反应 三、受体药物体外筛选 一、受体药物体外筛选的放射 配基结合分析 上世纪60年代前受体的研究都用整体动物，定性的研究，这样的研究效率低，药物用量大，整个研究工作速度很慢 上世纪60年代后受体的研究采用放射配基结合分析，受体研究进入分子和定量时代，研究效率高 ，药物用量小, 而且开展受体亚型的研究，大大加快了受体新药发展，因此，受体药物研究已从盲目的随机筛选进入根据一个已知受体样本为基础筛选毒副作用更小的新药开发, 是受体药物进入大发展时期 1996年有人统计了以生化类分子为靶点的现代治 疗药483种受体药物所占比例,见下表： 受体药物体外筛选的放射配基结合分析系统 1.准备受体膜或细胞株或细胞核标本 细胞株：是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群 细胞死亡 细胞培养 细胞株——特性不变 细胞癌变 2.放射性标记配体 用放射性元素标记配体（药物），然后观测这个分子在代谢和生命活动中的变化，因为只有标记了放射性，这些分子才能被观测到 3.要确定结合反应的平衡条件。包括温度、时间、缓冲液（离子强度及pH）等 调节这些因素可以获得最佳温育条件，以确保温育达到平衡 例 脐静脉内皮细胞株 抗炎药物的研究——该细胞株用于血管内皮细胞试验，炎症时介导白细胞穿越血管壁，起抗炎作用 二、竞争结合反应和饱和结合 反应 1.竞争结合反应: 竞争结合反应是一定量受体蛋白加一定量的放射配基，再加不同浓度的竞争结合物，可绘出竞争结合曲线，可获得IC50值 IC50中文名称叫做半抑制率，标准曲线是一个S型曲线 一般IC50的数值越小,说明配体的特异性越强，与受体结合不受其他因素的干扰 2.饱和结合反应:饱和结合反应是一定量受体蛋白递增的配基浓度，直到饱和结合状态。可绘出饱和结合曲线 饱和曲线图 拮抗剂浓度 IC50值与Ki值：表明抑制剂与受体结合作用强弱的指标 IC50值仅有相对意义，因为放射性比活度不同，受体用量不同,IC50值会不一样,常不能与其它实验室值相比较，它并不能反应外界抑制剂与内源性配基与受体的竞争是什么性质 Ki值:抑制常数,是外界抑制剂与受体的平衡解离常数，不受实验条件的影响，不同实验室的结果可以比较。所以是外界抑制剂最好的指标, 另外，它还能反映外界抑制剂与内源性配基对受体竞争是什么性质，是竞争结合，非竞争结合或反竞争结合等 对于筛选工作，IC50值,使用非常广泛，有实际意义。 如果对某些老药改进，选译副作用更小的新药，常用所谓相对结合亲和力（Relative binding affinity)数： 以相对结合亲和力来比较众多待试化合物与老药作参比标准 三. 受体药物体外筛选 1、手工筛选法： 操作过程包括采集, 制备受体制剂, 进行受体结合反应，一次实验只能做几个样品。对少数含有生物活性的化合物作进一步筛选,最后确定有希望成为先导化合物，这种方式也可用来筛选副作用小的受体药物 2、高通量和自动化筛选法: 这一方法的目标是短时间内筛选大量化合物，高通量筛选前提: (1).存有大量天然物提取物的样品库 (2).存有大量的化合物库,大量的合成化合物。如组合化学技术，起源于多肽合成，假如合成四肽，用5种氨基酸，可合成625种四肽，用10种氨基酸可合成10000种四肽 (3).特异性强，选择性好的受体反应系统 (4).自动化称量和加样系统 (5).自动化数据处理系统 3、高通量筛选分析方法和技术: (1)放射配基结合分析 (2)闪烁近邻分析(scintilation proximity assay) (3)时间分辨荧光(time resolved fluorescence) (4)荧光相关光谱学等 (5)酶联免疫吸附法 闪烁近邻分析(scintilation proximity assay：SPA) 1.原理：含有闪烁剂的微球或96孔板，用化学方法将受体蛋白偶联在它们的表面，试验时加含有H3等放射性标记配体的反应缓冲液，待反应平衡后,所形成的受体配体复合物紧贴微球表面,射线作用于闪烁剂，放射性测量仪器就能测量放射性计数。而游离的放射性配体与微球表面的距离只要大于1.0μm, 射线的能量被水吸收