转录激活因子FleQxoo原核表达及其与鞭毛基体基因fliExoo启动子的结合.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 39(5)：476481(2009) 转录激活因子 FleQxoo原核表达及其与 鞭毛基体基因 fliExoo启动子的结合 傅本重，吴茂森，陈华民，何晨阳 (中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193) 摘要：为了 明转录激活因子FleQxoo对水稻白叶枯病菌(Xanthomonasoryzaepv．oryzae，Xoo)鞭毛基体基因fliExoo的 转录凋控机理 ，本研究用PCR方法从Xoo野生型菌株PXO99 中克隆了fleQxoo基因，构建 了原核表达载体pET21-fleO— XO0，存大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行了诱导表达，通过Ni—NTA亲和层析纯化得到FleQxoo蛋 白；EMSA检测到FleQ— XOO与鞭毛基体基因启动子fliExoo—P片段的特异结合作用。这些结果为阐明FleQxoo直接调控鞭毛基体基因fliExoo的转 录提供了分子证据。 关键词：水稻自叶枯病菌；FleQxoo；原核表达；fliExoo；EMSA A transcripti0naIactivatorFieQxoo bindsto promoteroffliExoo，aflagellarbase bodygene in Xanthom onasoryzae pv．oryzae FU Ben—zhong，WUMao—sen，CHEN Hua— min，HEChen—yang (StateKeyLaboratoryforBiologyofPlantDiseasesandInsectPests，InstituteofPlantProtection， ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing】00193，China) Abstract：Toelucidatethetranscriptionalregulationmechanism offlagellargenesbytranscriptionalactivator FleQxooinXanthomonasoryzaepv．oryzae(Xoo)，thefleQxoogenewasclonedfrom thewild—typestrain PXO99 ofXoobyPCRandtheexpressionplasmidpET21-fleQxoowasconstructed．TheFleQxooproteinwas expressedinEscherichiacolistrainBL21(DE3)pLysSwithIPTG inductionandpurifiedthroughNi—NTA affinitychromatography．ThepurifiedFleQxoocouldbedirectlyboundtotheDNA rfagmentsoffliExoo promoterinvitrobyEMSA (ElecrtophoreticMobilityShiftAssays)．Theresultsprovidedtheevidencethat FleQxoomightregulatetheflagellargeneexpressionbydirectbindingtothepromotersinXoo． Keywords：Xanthomonasoryzaepv．oryzae；FleQXO0；prokaryoticexpression；fliExoo；EMSA 中图分类号：$435．111．47 文献标识码 ：A 文章编号 ：0412-0914(2009)05-0476-06 FleQ是NtrC蛋白家族 的转录激活子成员，它 子增强子结合蛋 白，可以结合到启动子上 盯 识别 包含一个N端 FleQ结构域、一个 AAAo-功能结 位点的上游或下游 』。在铜绿假单胞菌 (Pseudo． 构域和一个HTH(helix—rum—helix)DNA结合结构 monasaeruginosa)中FleQ是鞭毛基因表达调控 的 域 ，它与 盯协同作用调控细菌鞭毛基 因表达 J。 主控 因子 ，位于4个调控级联等级 的最顶端 ，它与 尽管RNAPcr与启动子结合形成 闭合的复合物， 盯协同作用调控 Ⅱ级鞭毛基因的表达 J。通过 但这种复合