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分光光度分析法 Spectrophotometry 一、实验目的 二、分光光度法基本原理简介 2、物质的吸收曲线 3、光的吸收定律——朗伯-比耳定律 朗伯—比耳定律数学表达式： T、A、c间的关系： A ＝ lg（I0/It) = -lg T = εb c 吸光度具有加和性：  在多组分体系中，吸光度具有加和性，即： A（总）＝ A1 + A2 +…+ An = ε1b c+ ε2b c+…+ εnb c 其方法和步骤是： 1）配制一组浓度不同的标准溶液(c1 、 c2 ……)； 2）在一定波长下，分别测定其吸光度(A1、A2……)。 3）以A为纵坐标，浓度c为横坐标，绘制曲线，得到一条通过原点的直线，称为标准曲线（A-c曲线）。 4）用完全相同的方法和步骤测定待测溶液的吸光度Ax，从标准曲线上找出对应的浓度cx值（ Ax ? cx ）。 a、目视比色法 用眼睛比较溶液颜色的深浅以确定物质浓度的方法称为目视比色法。 特点：设备简单、操作简便；无需单色光；准确度不高。 b、分光光度计 仪器基本组成 b.单色器 c. 样品室 1、显色反应 2、显色反应条件的选择 3、测量条件的选择 1）、显色反应 显色反应——使无色或浅色的待测组分转变为有色化合物的反应。 显色剂——与待测组分反应形成有色化合物的试剂成为。 Fe2++3R?[Fe(3R)]2+　（红橙色，?max=510 nm） R为邻二氮菲 2） 显色反应条件的选择 3）测定条件的选择 b.选择合适的参比溶液 c.控制适宜的吸光度（读数范围） 分光光度法测定铁的含量 三、实验步骤 四、实验注意事项 3、稳定性实验 试样溶液同实验1。 以试剂溶液作参比，在508 nm处，测定不同显色时间下的吸光度，并且绘制A-t曲线，考察反应时间的影响以及有色溶液的稳定性。 2、显色剂浓度的影响 试样溶液中除了邻二氮菲的加入量不同外，其余配制方法同实验1。 以试剂溶液作参比，在508 nm处，测定不同显色浓度下的吸光度，并且绘制A-V曲线，考察显色剂浓度的影响。 * * 1、了解分光光度法的基本原理，理解何谓吸收曲线。 2、掌握朗伯—比尔定律，理解何谓标准（工作）曲线。 3、了解显色反应及其影响因素，了解测量条件的选择。掌握光度法测定的条件及方案的拟定方法。 4、了解分光光度计的性能、结构及使用方法； 分光光度法（spectrophotometry）是基于物质分子对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。 按物质吸收光的波长不同，可分为紫外分光光度法、可见分光光度法及红外分光光度法。 特点： 灵敏度较高，适用于微量组分 (1~10?g·L-1)的测定； 误差较大，相对误差达到2~5%。 电磁波谱： X射线 0.1~100 nm 远紫外光 10~200 nm 近紫外光 200~400 nm 可见光 400~760 nm 近红外光 750~2500 nm 中红外光 2500~5000 nm 远红外光 5000~10000 nm 微 波 0.1~100 cm 无线电波 1~1000 m 1、物质的颜色与吸收光的关系 日光：紫 蓝 青 绿 黄 橙 红 复合光：由各种单色光组成的光。如白光(太阳光) 单色光：只具有一种波长的光。 要求：??=?2nm。 互补色光：如果把两种适当颜色的光按一定的强度比例混合也可以得到白光，这两种光就叫互补色光。 物质的颜色是由于物质对不同波长的光具有选择性的吸收作用而产生的。如：CuSO4呈兰色。 物质呈现的颜色和吸收的光颜色之间是互补关系。 光的互补：蓝?? 黄 日光 650~760nm 580~600nm 450~480nm 480~490nm 600~650nm 500~580nm 400~450nm 490~500nm 互补光 M + 热 M + 荧光或磷光 ?E = E2 - E1 = h ? 各能级是量子化 ；选择性吸收; 分子结构的复杂性使其对不同波长光的吸收程度不同； M + h ? ? M * 基态 激发态 E1