LC-MS联用原理及应用.pdfVIP

液相色谱—质谱联用的原理及应用 简介 1977 年，LC/MS 开始投放市场 1978 年，LC/MS 首次用于生物样品分析 1989 年，LC/MS/MS 取得成功 1991 年，API LC/MS 用于药物开发 1997 年，LC/MS/MS 用于药物动力学高通量筛选 2002 年美国质谱协会统计的药物色谱分析各种不同方法所占的比例。1990 年，HPLC 高达 85%，而2000 年下降到15%，相反，LC/MS 所占的份额从3%提高到大约80%。我们国家目 前在这方面可能相当于美国1990 年的水平。为此我们还有很长的一段路要走色谱质谱的在 线联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物更准确的定量和定 性分析。而且也简化了样品的前处理过程，使样品分析更简便。 色谱质谱联用包括气相色谱质谱联用(GC-MS)和液相色谱质谱联用(LC-MS)，液质联用与气质 联用互为补充，分析不同性质的化合物。 液质联用与气质联用的区别: 气质联用仪(GC-MS)是最早商品化的联用仪器，适宜分析小分子、易挥发、热稳定、能气化 的化合物；用电子轰击方式（EI）得到的谱图，可与标准谱库对比。 液质联用(LC-MS)主要可解决如下几方面的问题：不挥发性化合物分析测定；极性化合物的 分析测定；热不稳定化合物的分析测定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的 分析测定；没有商品化的谱库可对比查询，只能自己建库或自己解析谱图。 现代有机和生物质谱进展 在20 世纪80 及90 年代，质谱法经历了两次飞跃。在此之前，质谱法通常只能测定分子量 500Da 以下的小分子化合物。20 世纪70 年代，出现了场解吸（FD）离子化技术，能够测定 分子量高达1500~2000Da 的非挥发性化合物，但重复性差。20 世纪80 年代初发明了快原子 质谱法（FAB-MS），能够分析分子量达数千的多肽。 随着生命科学的发展，欲分析的样品更加复杂，分子量范围也更大，因此，电喷雾离子化质 谱法（ESI-MS）和基质辅助激光解吸离子化质谱法（MALDI-MS）应运而生。 目前的有机质谱和生物质谱仪，除了GC-MS 的EI 和CI 源，离子化方式有大气压电离（API） （包括大气压电喷雾电离ESI、大气压化学电离APCI、大气压光电离APPI）与基质辅助激光 解吸电离。前者常采用四极杆或离子阱质量分析器，统称 API-MS。后者常用飞行时间作为 质量分析器，所构成的仪器称为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS）。 API-MS 的特点是可以和液相色谱、毛细管电泳等分离手段联用，扩展了应用范围，包括药 物代谢、临床和法医学、环境分析、食品检验、组合化学、有机化学的应用等；MALDI-TOF-MS 的特点是对盐和添加物的耐受能力高，且测样速度快，操作简单。 质谱原理简介： 质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分 析目的的一种分析方法。以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标，离子质荷比为横坐标所 作的条状图就是我们常见的质谱图。 常见术语: 质荷比: 离子质量(以相对原子量单位计)与它所带电荷(以电子电量为单位计)的比值,写作 m/Z. 峰: 质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰. 离子丰度: 检测器检测到的离子信号强度. 基峰: 在质谱图中，指定质荷比范围内强度最大的离子峰称作基峰. 总离子流图；质量色谱图；准分子离子；碎片离子；多电荷离子；同位素离子 总离子流图: 在选定的质量范围内，所有离子强度的总和对时间或扫描次数所作的图,也称TIC 图. 质量色谱图 指定某一质量(或质荷比)的离子其强度对时间所作的图. 利用质量色谱图来确定特征离子，在复杂混合物分析及痕量分析时是 LC/MS 测定中最有用 的方式。当样品浓度很低时LC/MS 的TIC 上往往看不到峰，此时，根据得到的分子量信息， 输入M+1 或M+23 等数值，观察提取离子的质量色谱图，检验直接进样得到的信息是否在 LC/MS 上都能反映出来，确定LC 条件是否合适，以后进行MRM 等其他扫描方式的测定时 可作为参考。 1.0 指与分子存在简单关系的离子，通过它可以确定分子量.液质中最常见的准分子离子峰是 [M+H]+ 或[M-H]- . 在ESI 中, 往往生成质量大于分子量的离子如M+1,M+23,M+39,M+18称准分子离子,表示 为:[M+H]+,[M+Na]+等碎片离子： 准分子离子经过一级或多级裂解生成的产物离子. 碎片峰的数目及其丰度则与分子结构有关,数目多表示