血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)汇总解析.pptVIP

（2）全部凝集 当红细胞受细菌污染或保存时间过长可出现此现象。 抗原滴加时出现失误，工作抗原效价过高。 生理盐水受细菌污染或其它因素. （3） 红细胞全部下滑 ①当配制抗原时，配制工作抗原效价过低，不足以凝集鸡红细胞。 ②加样时所有孔全部加成生理盐水亦出现全部下滑现象。 （4）不同来源、不同浓度的红细胞会使结果差异很大，所以红细胞来源一定要相同： 一般需要3只或3只以上公鸡来提供红细胞，将3只以上公鸡红细胞混合在一起。 有抗体鸡提供的红细胞需要更多次数洗涤。但要注意有时不同的公鸡提供的红细胞对禽流感H5亚型抗体测定，效价差异很大。不同浓度的红细胞对抗体测定也有影响。 （5）温度对实验结果也有影响，一般要求在室温下进行实验，当实验温度低于4℃时红细胞有时会发生自凝现象。 （6）抗原与抗体作用时间过长或过短对结果影响较大：过短出现凝集不完全；过长出现洗脱现象。 （7）96孔V型板是否洗净，是否光滑也会影响实验结果。 总之，在进行禽流感血凝抑制试验时应综合考虑各方面因素，制定一个标准化操作方法以免对结果判断产生误差！ 谢谢大家！ 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 血凝（HA）和血凝抑制试验（HI） 主要内容 一、基本概念 二、HA和HI实验在禽病诊断中的作用 三、基本操作 四、注意事项 一、基本概念 1、血凝试验(HA) 1.1 定义 某此病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(hemagglutination，HA)，也称直接血凝反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HA) 。 常见于正粘病毒（如AIV）、副粘病毒（如NDV）和某些黄病毒（如JEV）、痘病毒、以及经过处理过后的IBV。 1.2 血凝类型： (1) 可逆转型　 血凝素与病毒颗粒易分开，经超速离心后，病毒颗粒沉淀于管底，血凝素则游离于上清液内。这种血凝素凝集红细胞的现象是可逆的，即被凝集的红细胞释放了吸附于表面的血凝素后，可再与该血凝素发生凝集。 如天花、鼠疫等病毒。 (2) 不可逆转型　 血凝素与病毒颗粒结合得比较紧密，不经过特殊处理血凝素不能与病毒颗粒分开，这种病毒引起的红细胞凝集，是不可逆转的。在一定的温度 (37℃)下，病毒释放出一种能破坏红细胞表面受体糖苷键的N-乙酰神经氨酸酶，当病毒颗粒从红细胞表面游离出来后红细胞表面受体已被破坏而失去了再凝集病毒的能力。 如流感病毒、鸡新城疫病毒等。? (3) 凝集条件严格型　 有些病毒及其血凝素凝集红细胞的条件很严格，不仅对不同种动物的红细胞有严格的选择，即是对同种动物，由于性别和年龄的不同，对红细胞的凝集性能亦有差异（如JEV对公鹅的红细胞凝集性能比对经产老龄母鹅的红细胞凝集性能好） 。除此之处，还对缓冲液的pH值、温度及盐浓度等的要求均很严格。 1.3 原理 血凝的原理因不同的病毒而有所不同,如: 痘病毒对鸡的红细胞发生凝集并非是病毒本身，而是痘病毒的产物--类脂蛋白的作用。 流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素与红细胞表面的受体糖蛋白相互吸附而发生的。 2、血凝抑制试验(HI) 2.1定义 当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称血凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HI) 。 该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。 2.2原理 特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。 二、HA和HI实验在禽病诊断中的作用 1、用于禽流感、新城疫等具有血凝性病毒的鉴定 根据抗原与相应抗体的特异性中和反应原理，给未知病毒悬液中加入已知的抗禽流感病毒阳性血清或已知的抗新城疫病毒阳性血清，相应病毒便丧失了其凝集红细胞的能力。因此，可利用从发病的鸡、鸭、鹅体内分离的病毒作HA和HI试验。病毒悬液能凝集红细胞，并且能被已知的抗血清（阳性血清）所抑制，那么该病毒即是已知阳性血清相对应的病毒。如用新城疫阳性血清完全抑制了未知病毒培养物的血凝性，那么，这个未知病毒培养物就是新城疫病毒；如果病毒悬液虽然能凝集鸡红细胞，但不能被鸡新城疫血清所抑制，说明不是鸡新城疫病毒，可能是