新孢子虫病P43蛋白质（包涵体）的纯化及rELISA方法的建立.pdfVIP

新 疆 农 业 大 学 学 报 2010，33(4)：294～298 JournalofXinjiangAgriculturalUniversity 文章编号 ：1007—8614(2010)04—0294—05 新孢子虫病P43蛋白质 (包涵体)的纯化及 rELISA方法的建立 杨 帆，王莲芳，陈 亮 ，巴音查汗 (新疆农业大学 动物医学学院，乌鲁木齐 830052) 摘 要： 为建立新孢子虫病间接酶联免疫吸附试验(rEL1SA)检测方法，先诱导表达 GST—P43包涵体蛋 白，并对 其进行提取、纯化、复性处理，再 以复性后的P43蛋白作为抗原，优化 rEIISA检测方法。结果表明，这种包涵体处 理方法，可使其纯度达到 87 ，复性后的 目的蛋 白具有 良好的免疫活性 。通过对 rELISA各反应条件 的优化 ，确定 了最佳反应条件 ，血清稀释倍数为 1：i00，抗原包被浓度为7b~g／mI，封闭液为0．5 脱脂乳 ，酶标抗体 的工作浓度 为 1：4000，酶标抗体作用时间为 1h，底物作用时间25min。且该方法不与 弓形虫和布鲁氏菌病发生交叉反应。 关键词： 新孢子虫 ；P43蛋 白；纯化 ；rELISA 中图分类号 ：$851．723 文献标识码 ：A Purification ofP43ProteinofNeosporosis andDevelopmentofrELISA M ethod YANG Fan，WANG Lian—fang，CHEN Liang，Bayinchahan (CollegeofAnimalMedicine，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi830052，China) Abstract： DevelopmentofindirectElISA forthedetectionofneosporosiswereasfollows：First，thefu— sionproteinGST—P43wasinduced，whichwasextracted，purifiedandtreatedwithrenaturation，afterwhich P43proteinwereusedastheantigenone，andrELISA detectionmethodwasoptimized．Theresultsshowed thatinclusionbodiespurifiedbytreatmentcouldmakethepurityreach87 ．Theafterrenaturationtheaim proteinhasgoodimmuneactivity．TheoptimalreactionconditionsofrEIISA weredetermined，theantigen coatingconcentrationoftheproteinwas7x／g／mL：Thedilutionrateoftheserum sampleswas1：100；Bloc— kingsolutionwas0．5 skim milk；Theoptimaldilution ofHRP～IgG was1：4000；Thereaction timeof coatingantigenwithserum andserum withHRP—IgG was1h：Thetimeofcolordevelopmentreactionwas 25min．Thetestshowedtherewasnocrossreactionbetweenthismethod，Toxoplasmaandbrucelliasis． Keywords： N ．caninum ；P43protein；purification；indirectELISA 新孢子虫病是 由犬新孢子 虫 (Neosporacani— 对 NcSRS2基因进行原核表达，却发现产生的 目的 hum)寄生于牛、羊、犬等多种动物细胞 内引起的一 蛋白为包涵体形式，不具有天然结构、没有活性，因 种原虫病 ，主要引起流产或死胎 ，并引发新生幼畜的 而限制了