根癌农杆菌介导AFL2基因转化苹果实生苗的研究.pdfVIP

维普资讯 果 树 学 报 2008，25(4)：454-457 根癌农杆菌介导A 基因转化 苹果实生苗的研究 刘建国 ．一，曹秋芬s，曹尚银 ，刘丽峰 ，章 镇 ，薛华柏 2郭俊英2，陈玉玲 (南京农业大学园艺学院，南京 210095；中国农业科学院郑州果树研究所，郑州 450009； 山西省农业科学 院农业生物技术研究 中心 ，太原 030031) 摘 要：将苹果杂交种 (Kg2号×新红星)种子用50mgL／GA 液打破休眠，经消毒处理后接种在Ms培养基上，获 得无菌组培苗 。以该组培苗叶片为试材 ，通过不 同激素组合 ，获得适宜于植株再生的培养基为 MS+NAA0．4mgL／+ TDZ2．0m观 。通过不 同质量浓度的Karl筛选 ，证 明 15mgL／是 Kan最佳的选择 。利用含AFL2基 因的根癌农杆菌 LBA4404转化苹果叶片，得到转AFL2基因的阳性植株 ，经PCR检测 ，有 2株 出现特异性条带，证 明该基因已经整合 到苹果基 因组 中。 关键词 ：苹果 ；根癌农杆菌；AFL2；转化 中图分类号：$661．1 文献标识码：A 文章编号：1009—9980(2008)04--454—04 Transformation ofappleseedlingwithAFL2genemediatedbyAgrobac· teriumtumefaciens LIUJian—guo一，CAOQiu—fen。，CAOShang—yin ，LIULi—feng~，ZHANGZhen，XUEHua—bai，GUO Jun-yinga，CHENYu-linga (CollegeofHortieulture，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing，JioltgsU210095China；2ZhengzhouFruitResearchInstitute，CAAS， Zhengzhoa，Henrat450009China；~Agri—BioteehnologyResearchCenter，Shar~xiAcademy0厂AgriculturalScience，Taiyuan，Shanxi030031 China) Abstract：Dormancyofapplehybridseeds(NagafuNo．2XStarkrimson)wasbrokenbyusingliquidof50mgL／GAzandster- ilized，thenculturedinMSmedium forgettingin-vitro-culturedseedlings．Leavesoftissueculturedseedlingsweretreatedby differenthm~noneconcentration．Theresultsshowedthattheoptimum regenerationmedium wasMS+NAA 0．4mg／L+TDZ 2．0mg／L．ByscreeningofKanconcentration，itindicatedthattheoptimum concentrationwas15mg／L．Kanamyeinresistance transgenicseedlingswereobtainedthroughAgrobacterium-mediatedprocesswhichcontainsAFL2geneandtwoofthem had specificbandbyPCRamplificationanalysis．ItwaslikelytoshowthatAFL2genewasintegratedintotheapplegenome． Keywords：Appleseedling；Agrobacteriumtumefaciens；AFL2；Transfomration 果树花芽分化研究是果树生理学的重要研究内