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中国磨学通提 2010，26(22)：12—15
ChineseAgficulturalScienceBulletin
犬传染性肝炎病毒IX基因的克隆及原核表达
杨 拓 ，张 洋 ，孟 焕 ，徐春瑛 ，袁 宝 ，文力正 ，陈承祯 ，任文陟。，陈 健
(吉林大学畜牧兽医学院，长春 130062；吉林大学试验动物中心，长春 130062)
摘 要：通过对犬传染性肝炎病毒(cAV_I)基因组的提取，PCR扩增获得 了大小为 1109bpcAV-I病毒结
构 基因片段，成功地将 基因克隆至载体pMD．18T中，构建了p 原核表达载~pGEX一4T1一IX，将重
组质粒pGEX一4T1．IX转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞 中，并实现了 基因在该菌中的高效表
达。对表达产物进行了Westernblot检测，分析结果表 明表达蛋 白能与抗CAV-I阳性血清发生特异性的
抗原一抗体反应，为CAV-I的血清学诊断和免疫监测提供大量优质的抗原奠定了基础。
关键词：犬传染性肝炎病毒；／X基因；IX蛋白；原核表达
中图分类号：$855．3 文献标志码 ：A 论文编号：2010．1263
ExpressionoftheIX GeneofCAV—IinE coliBL21
YangTuo1,ZhangYang，MengHuan’，XuChunying，YuanBao，
WenLizheng2，ChenChengzhen，RenWenzhi2,ChenJian
,
(TheCollegeofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine,JilinUniversity，Changehun130062；
ZLaboratoryAnimalCenter，JilinUniversity，Changehun130062)
Abstract：Theauthorfirstlyadoptedthemethodofconcentrationofthevirusandextractitsgenome．Then
referringtothesequencewhichispublishedingenebank，theauthordesignedapairofprimers，productofthe
PCRamplification，p／Xprotein，wasanalyzedbyagarosegelelectrophoresisanddemonstratedtobeaspecific
band of1099bp．Thefragmentwascloned intothepMD18一T vector．AftercloningitintotheT vector,the
authorsequencedthetargetedfragmentandtheresultshowedthatitwasright．Thentheauthorligateditinto
the expression vectorpGEX-4T-1with DNA T4 ligase，whichwasdigestedby the sametwo enzymes．
FurtherlydigestingbyEeoRIandSMIforidentification，theauthorfinallygotthepositiveexpressionvector
pGEX一4T1一IX．AftertransformingtherecombinantplasmidpGEX-4TI-IXtothehostE．co／iBL21(DE3)for
2-3hours，theauthorinduceditbyIPTGwiththeterminalconcentrationoflmmol／L．Thewholequantityof
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