睾丸酮丛毛单胞菌工程菌构建及稳定性分析.pdfVIP

农业生物技术学报，2010年，第 18卷，第4期，第 807～814页 JournalofAgriculturalBiotechnology，2010，Vo1 ． 18，No．4，807～814 研究资源 Resources 睾丸酮丛毛单胞菌工程菌构建及稳定性分析 戴艺民 周以飞 陈建秋 林江波 张剑亮 ： 林龙云2 潘大仁2 1福建省农科院甘蔗研究所，漳州 363005；2福建农林大学作物学院，福州350002 通讯作者、pandaren@yahoo．com．cn 摘 要 本研究根据同源重组原理，利用电穿孔法将重组质粒pKtac1．act1和pKtac1．act2分别转化睾丸酮 丛毛单胞菌 Comamonastestosteroni)，经PCR和Southernblot筛选获得2株睾丸酮丛毛单胞菌基因工程菌。 对这两株基因工程菌的关键酶 3o．【羟基类固醇脱氢酶 ／碳酰基还原酶 f3cx—hydroxysteroiddehydrogenase／ carbonylreductase，3cx—HSD／CR)表达情况和细菌稳定性的分析结果表明：两株基因工程菌在没有诱导剂诱导 的情况下，其 3a．HSD／CR的表达量比原始菌提高了近 20倍。添加抗生素进行培养，两株工程菌的activator 和 3一HSD／CR表达均较稳定；而在不添加抗生素的培养基上培养时，两株工程菌的activator和 3oL．HSD／CR 的表达变化较大，蛋 白总体表达水平比添加抗生素时低。研究结果可以初步推断，3一HSD／CR的表达受 activator基因的表达调控。 关键词 睾丸酮丛毛单胞菌，3仅．羟基类固醇脱氢酶 ／碳酰基还原酶(3or．HSD／CR)，activator，工程菌，稳定性 ConstmctionandStabilityAnalysisoftheEngineeredComnnwnastestosteroni DaiYimin ZhouYifei ChenJianqiu LinJiangbo ZhangJianliangz LinLongyun PanDaren’ 1SugarcaneResearchInstitute，FujianAcademyofAgriculturalSciences，Zhangzhou363005，China；2CollegeofCropScience，FujianAgricultureand ForestryUniversity，Fuzhou350002，China Correspondingauthor，pandaren@yhaoo．com．cn DOI：10．3969~．issn．1674—7968．2010．04．029 Abstract RecombinantplasmidspKtac1一act1andpKtacl—act2wereintegrated intoComamonastestosteroni chromosomebyelectroporationrespectively，andtwoengineeringstrainswereobtainedandidentifiedbytheanal— ysisofPCR andSouthern blot．Expressionandstabilityof3 一hydroxysteroiddehydrogenase／carbonylreductase f3ol-HSD／CR)ofengineeringstrainsweredetected．Theresultsindicatedthattheexpressionof3o一【HSD／CRal- most20一foldsincreasedinwt oengineeringstrainsthanthatofthewildtypewithoutinducing；andtheexpressions ofactivatorand3a-HSD／CR werequitehighandstablewhenengineeringstrainsinoculatedinLB medium with antibiotic；butunstablewheninoculatedinLB medium withoutantibiotic．Thepreliminaryresultsindicatethatthe expressionof3~x—HSD／CRcanberegulatedbytheactivatorgene． Keywords Comamonastestoste