流式细胞术细胞核分离缓冲液的改良及大、小果型荔枝幼果和果皮细胞分裂活性比较.pdfVIP

园 艺 学 报 2011 ，38 （9 ）：1781 –1790 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 流式细胞术细胞核分离缓冲液的改良及大、小果 型荔枝幼果和果皮细胞分裂活性比较 李彩琴，王泽槐，徐咏珊，张劲霭，李建国* （华南农业大学中国荔枝研究中心，广州 510642 ） 摘 要：以荔枝幼果为材料，比较5 种常用细胞核分离缓冲液对制备样品 DNA 分辨率效果的影响， 发现在 Otto 缓冲液基础上进行适当改进（增加还原剂种类和含量，把 RNaseA 直接加入缓冲液，降低离 心力），可获得最佳的提取效果，分辨率高，细胞 G1/G0 峰产生的变异系数低。通过比较具有相似遗传背 景的‘妃子笑’早花大果和晚花小果以及具有不同遗传背景的大果（‘四两果’）和小果（‘陈紫’）型荔 枝品种之间果实发育前期的幼果和果皮的细胞分裂活性发现，大果的细胞分裂活性高于小果，且持续时 间长，说明果实大小差异与果实发育前期细胞分裂活性有关。 关键词：荔枝；细胞分裂活性；流式细胞术；果实大小；核悬液 中图分类号：S 667.1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2011 ）09-1781-10 Improvement of the Cell Nuclei Suspensions for Flow Cytometry and Comparison on the Cell Division Activity of Litchi Fruitlet and Pericarp Which Having Different Final Fruit Size * LI Cai-qin ，WANG Ze-huai ，XU Yong-shan ，ZHANG Jin-ai ，and LI Jian-guo （China Litchi Research Center，South China Agricultural University ，Guangzhou 510642，China ） Abstract ：The effects of the five commonly used buffers on DNA nuclei isolation from fruitlet of litchi were evaluated. The results showed that improved method on Otto buffers （adding the content and type of reducing agent into Otto buffers ，putting RNase A directly into the buffer and reducing the centrifugal force ）could get the highest resolution and the lowest coefficient of variation G /G peak of 1 0 DNA nucleus ，which was suitable for detecting the cell division activity of litchi fruitlet and pericarp. By comparing with cell division activities of fruitlet and pericarp in the fi