猕猴桃GalUR表达与抗坏血酸积累的关系.pdfVIP

园 艺 学 报 2011 ，38 （9 ）：1641 –1649 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 猕猴桃 GalUR 表达与抗坏血酸积累的关系 李明军，刘 军，梁 东，郭春苗，马锋旺* （西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌 712100 ） 摘 要：通过 RT-PCR 从美味猕猴桃（Actinidia deliciosa ）果实中克隆了 D –半乳糖醛酸还原酶 （GalUR ）全长 cDNA 序列，并分析其序列特征，进行原核表达，制备特异抗体，分析其 mRNA 及蛋白 表达水平与果实发育过程及不同组织中抗坏血酸（AsA ）合成和积累的关系。结果表明：克隆的 GalUR cDNA （GenBank 登录号为 GU339035 ）包含的最大开放阅读框（open reading frame，ORF ）为990 bp， 编码 329 个氨基酸残基，预测分子量为 37 kD，与报道的草莓等其他植物 GalUR 具有较高的相似性。构 ＋）-GalUR 载体在大肠杆菌 BL21 （E . coli BL21 ）中异源表达后，获得了主要以包涵体存 建的 pET-32a （ 在约 58 kD 的融合蛋白 GalUR-His （His 约 21 kD ）。以该蛋白制备抗体，与重组蛋白的Western 杂交表明 该抗体能与 GalUR 蛋白发生特异反应。对猕猴桃可溶性蛋白杂交显示，猕猴桃体内 GalUR 蛋白的分子量 约 37 kD 。在猕猴桃不同组织和发育过程中，GalUR 表达水平与 AsA 含量表现为高度一致，但前体饲喂 发现，与 L –半乳糖相比，D –半乳糖醛酸并不能有效促进猕猴桃AsA 的合成。这些结果表明以单体形式 存在的 GalUR 与猕猴桃 AsA 合成有着密切关系，但它可能并不是猕猴桃 AsA 积累的主要调控环节。 关键词：猕猴桃；D –半乳糖醛酸还原酶；原核表达；Western 杂交；维生素 C 中图分类号：S 663.4 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2011 ）09-1641-09 The Relationship Between GalUR Expression and Ascorbate Accumulation in Kiwifruit * LI Ming-jun ，LIU Jun ，LIANG Dong ，GUO Chun-miao ，and MA Feng-wang （College of Horticulture，Northwest A F University ，Yangling，Shaanxi 712100，China） Abstract ：In present study ，D-galacturonate reductase （GalUR ）cDNA were cloned from young fruit of Actinidia deliciosa ‘Qinmei ’，expressed it in E. coli ，and prepared the specific antibody，then we analyzed the relationship between its transcript level and AsA level during fruit development and among different tissues of kiwifruit. The results showed that cDNA of GalUR from young fruit of kiwi had an 990 bp open reading frame （ORF