月季CBF 转录因子基因的克隆及表达分析.pdfVIP

园 艺 学 报 2012 ，39 （8 ）：1596 –1602 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 月季 CBF 转录因子基因的克隆及表达分析 1 2 2 1 1,2,* 翟俊峰 ，王法微 ，王 南 ，宗俊梅 ，李海燕 1 2 （ 吉林农业大学生命科学学院，长春 130118 ； 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心，长春 130118） 摘 要：根据 CBF （C-repeat binding factor ）AP2/EREBP 保守区设计 1 对简并引物，采用 PCR 方法 对月季‘寒锦 4 号’（Rosa hybrida ‘Hanjin 4 ’）CBF 转录因子基因中间片段进行克隆；再根据中间片段 区域设计了两对特异引物，采用反向 PCR 方法对该基因的 5 和 3 端的序列进行克隆，将中间片段与反向 PCR 产物拼接得到 CBF 基因全长序列，命名为 RhCBF ，GenBank 注册编号为 EF582843 ；该基因序列长 758 bp，ORF 为 603 bp，编码200 个氨基酸；同时，根据基因序列设计 1 对特异引物，利用荧光定量 PCR 分析月季 CBF 在不同逆境胁迫下的表达情况。结果显示低温和盐均可以诱导 RhCBF 的表达，而干旱处理 不能诱导其表达。 关键词：月季；CBF 转录因子；基因；克隆；表达 中图分类号：S 685.12 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2012 ）08-1596-07 Cloning and Expression Profiling of the Transcription Factor CBF Gene from Rosa hybrida 1 2 2 1 1,2,* ZHAI Jun-feng ，WANG Fa-wei ，WANG Nan ，ZONG Jun-mei ，and LI Hai-yan 1 2 （College of Life Sciences，Jilin Agricultural University ，Changchun 130118，China；Ministry of Education Engineering Research Center of Bioreactor and Pharmaceutical Development ，Jilin Agricultural University ，Changchun 130118 ，China） Abstract ：We firstly cloned the partial fragment of CBF from Rosa hybrida ‘Hanjin 4 ’using homology cloning methods according to AP2/EREBP conserved sequences. Then ，two pairs of specific primers for inverse PCR were designed to clone the 5 and 3 end sequences of CBF gene ，respectively. The resulting 5 and 3 end sequences and t