人骨髓间充质干细胞培养方法教材.PDFVIP

细胞生物学杂志 Chinese Journal of Cell Biology 2006, 28: 792-796 人骨髓间充质干细胞培养方法 1 * 王　挺　姚　行　张　铭 1 (浙江大学生命科学学院细胞与遗传研究所，杭州310058；湖州中心医院，湖州 313000) 摘要　　骨髓间充质干细胞(BMMSCs)是一种多潜能的成体干细胞，在细胞治疗和组织工程 上具有广阔的应用前景。对供体年龄、分离方法、培养密度、培养基和培养基质表面性质对细胞 增殖的影响进行了比较，重点阐述了用人自体血清结合多种细胞因子，替代胎牛血清培养 BMMSCs的效果，转染端粒酶基因的BMMSCs的增殖能力和分化潜能，以及灌注培养反应器用于 大规模培养的技术进展。 关键词　　人骨髓间充质干细胞； 胎牛血清替代物； 增殖； 灌注培养 骨髓间充质干细胞(BMMSCs)是一种具有多分化 居。他们认为血管周围的生境有利于MSCs生存， [1] 潜能的成体干细胞 。上世纪60年代人们发现它们 因此MSCs可以从血管中迁出，在血管周围定居。 能在体外或体内分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪 这些不同组织来源的MSCs形态相似，表面标志通 - - - + 细胞。随后又陆续有报道能分化成心肌、骨骼肌、 常表现为CD45，CD34，CD14，STRO-1， + + + [1] 神经细胞、造血干细胞、肌腱、肝组织、肾组织 SH2，SH3，SH4 。但是，到目前为止，还 [1, 2] 和连接组织 。在临床上，人们已经成功地将骨 没有发现间充质干细胞的特有标志。而且这些细胞 髓间充质干细胞移植到患者体内，用于治疗骨组织 具有相似的分化潜能，它们都能在一定条件下分化 [3, 4] 缺损和心肌梗塞等疾病 。由于其较强的增殖能 为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等。除直接从成 力和较低的免疫原性，间充质干细胞也很有可能为 体组织中获取外，人骨髓间充质干细胞还可以由胚 治疗帕金森综合征提供新的途径，在细胞治疗和组 胎干细胞体外分化而来，这些细胞同样保持了向成 [5, 6] [10] 织工程上拥有越来越广阔的前景 。 骨细胞和脂肪细胞分化的潜能 。 9 最近的研究认为，骨髓间充质干细胞的活力， 由于细胞治疗通常需要高剂量(10个左右) BMMSCs，因此，改进BMMSCs培养方法，提高 增殖能力和分化潜能与捐献者年龄和取材部位有 BMMSCs的扩增效率，同时保持多向分化潜能，克 关。来自幼年个体的细胞增殖需要的时间较短，扩 服血清的影响，是达到治疗需要的关键。本文报道 增迅速，细胞活力较高。而来自老年个体的细胞较 [11] 了这些领域的最新进展。 难培养。Mareschi等 研究后认为来自儿童的 BMMSCs增殖速度是成人BMMSCs的2倍以上。 [12] 1细胞来源 Zhang等 发现幼年大鼠骨髓中的间充质干细胞多于 [7] 老年大鼠，随着年龄的增加，骨髓细胞的克隆形成 1999年，Pittenger等 首先用单细胞培养的方