三新型疫苗载体生物安全性问题.PDF

（或基于复制酶的DNA类似物）的细胞中抗原的产量并不依赖转染的RNA或DNA 的量。与甲病 毒感染细胞相似，以自我复制RNA转染的哺乳动物细胞是基于甲病毒复制酶引起宿主细胞凋亡 的。 人们认为这是宿主细胞企图限制病毒复制的保护反应。因此，假定自我复制RNA疫苗能够 通过安全方式模仿病毒感染，就可能在转染宿主细胞中实现抗原的高效表达，这可能会激活抗 病毒途径，该途径将增强自我复制RNA编码抗原的免疫应答。 三 新型疫苗载体的生物安全性问题 1、 核酸疫苗的安全性 目前核酸疫苗接种涉及的可能机理中还有许多问题尚待解答，然而不难看出，直接接种抗 原基因免疫机体具有许多优点。 直接接种抗原基因免疫机体具有以下优点 i. 与传统类型疫苗相比，核酸免疫可全方位调动机体的免疫系统，诱发广泛的体液和 细胞免疫应答；同时，由于表达抗原的时间较长，可引起持久的体液和细胞免疫； ii. 此种技术为肿瘤和病毒免疫学提供了一种特别有用的工具，可用于肿瘤和传染病的 治疗，因为这种技术可诱发免疫应答的所有方面，尤其是CO8+CTL应答对这两类疾 病的病理过程都很重要； iii. 制备简便、省时省力。由于核酸免疫利用现有成熟的基因重组技术，直接在宿主体 内表达目的抗原，从而省略了传统疫苗复杂的体外表达、纯化和加工的过程；此 外，对于那些突发性、抗原性漂移迅速的疾病，例如流感病毒来说，这种方法在流 行病暴发时可快速开发新型疫苗； iv. 比较安全。核酸疫苗一般采用表达载体在动物细胞内进行抗原表达，与减毒活疫苗 相比，可避免病毒本身存在的复毒和病毒基因组整合到宿主染色体的危险性； v. 可提供多种病毒株的广谱有效疫苗。利用一种表达载体可同时表达多种病毒的抗原 蛋白，诱导机体产生针对多种病毒的免疫应答，从而起到一种核酸疫苗同时预防和 治疗多种疾病的效果。 尽管各种核酸疫苗的研究如雨后春笋般涌现，而且与传统类型疫苗相比具有上述优点，但 到目前为止，仅有少数的如马西尼罗病毒 DNA疫苗和鲑鱼传染性出血性坏死病毒DNA疫苗等获 准上市，不过针对疟疾、埃博拉病毒、艾滋病和肿瘤的疫苗也相继通过FDA批准进入了临床试 验。早在1996年，美国 FDA就颁布了相关文件，规定主要从系统毒性、基因毒性、生殖毒性、 免疫毒性和致癌性等方面对DNA疫苗临床前的安全性进行评价。 1717 生命奥秘 1.1 基因整合 质粒 DNA 是否与宿主染色体 DNA 发生整合，这是人们最关心的 问题之一。 外源基因的导入会引起内源性原癌基因的插入性激活和抑癌基因 的插入性失活等潜在危险。DNA 疫苗经过不同的免疫传递方式可部分 进入细胞，由细胞内的表达系统表达，进而产生免疫反应。通常情况 下，游离的外源质粒位于细胞质中，由胞内核酸酶降解及甲基化酶甲 基化而失活，经过一定时间可完全代谢。进入细胞的外源DNA ，也存 在进入细胞核的可能性，进入细胞核的质粒，存在着潜在的同基因组 整合的危险。基因整合可以通过随机插入、同源重组或逆转录病毒插 入造成基因的断裂或重排，诱发染色体的不稳定性，产生遗传毒性或 致瘤反应，其中最有效的是逆转录病毒插入。Polling等人在2002年曾 报道给小种猪模型注射乙肝 DNA 疫苗，在 57d 时注射部位仍能检出注 射的DNA疫苗，14 1d 后才被完全代谢，说明DNA有整合的可能性，但 是比基因组随机突变的概率低3个数量级。 DNA疫苗主要是由原核细胞复制元件、免疫原基因、致病性病毒 启动子和终止子等基因元件组成的真核表达质粒。常用的致病性病毒 启动子有人巨细胞病毒 （hCMV ）、猴病毒40 （SV40 ）、小鼠白血病 病毒 （murine leukaemia virus ）、鼠淋巴肉瘤病毒