A-第14章 细胞分化狄侥分子机制.pptVIP

第14章 细胞分化的分子机制 不同基因表达的调控是在以下几个水平完成的: 不同基因的选择转录、RNA的选择加工和翻译水平的调控。 一. 发育中基因转录水平的调控 1. 珠蛋白基因的转录：利用珠蛋白mRNA反转录制备cDNA 探针检测鸡胚红细胞中血红蛋白的合成。 发现在孵化23小时鸡胚前部明区血岛中可见红细胞前体，但无珠蛋白基因的转录。经2次细胞分裂, 在孵化35小时鸡胚中珠蛋白基因开始转录。 成人的血红蛋白由 4 个珠蛋白亚单位(2个α- 和2个β- ) 和4个血红素(亚铁原卟啉)分子组成(图)。 在发育过程中血红蛋白中的珠蛋白亚单位发生变化： 胚胎血红蛋白由2个ζ-珠蛋白链和2个ε-珠蛋白链组成; 胎儿血红蛋白由2个α- 珠蛋白链和2个γ-珠蛋白链组成; 成人变为2个α- 珠蛋白链和2个β- 珠蛋白链，和少量α2 δ2 。 在正常成人中α2 β2占97%, α2 δ2 占2-3%，α2 γ 2占1%。 人的ζ和 α 基因在16号染色体上，ε、 γ、 δ和β基因在11号染色体上分别依次排列，反映了血红蛋白从胚胎到胎儿再到成体转变中基因开关的顺序。 在胚胎发育过程中，血红蛋白的构成发生系列变化的同时，红细胞产生也发生系列变化：在胚龄4-6周由卵黄囊产生，6周到出生由肝脏产生，18周至出生脾脏也能产生红细胞，18周直到成体均由骨髓产生（下图).以上尽管时间上有重叠，但它们产生红细胞的功能大小有差异。 右图示在11号染色体上由左至右ε-、 γ-、 δ-和β-珠蛋白基因的排列顺序。在ε-珠蛋白基因上方6-22kb处有一个特殊的红色 LCR (locus control region)区，此区含有4个DNA酶 I 敏感位点(箭头示)，第5个DNA 酶I 敏感位点位于β -珠蛋白基因下方(箭头示), 此区的缺失导致γ-珠蛋白基因转录的永存，成为遗传性的胎儿血红蛋白永存(persistence)。 ε-珠蛋白(胚胎的)基因下方是2个几乎相等的 γ-珠蛋白 (胎儿的)基因, 它们后边是成体的δ-和β-珠蛋白基因。 由Felsenfeld (1992)提出的关于LCR活动的模型.图 2. DNA甲基化和基因活动 人们经常设想一个基因含有完全相同的核苷酸而它是有活性的或无活性的。 在1948年Hotchkiss在DNA中发现“第5个碱基”，5-甲基胞嘧啶。在真核细胞中，这个碱基是在DNA复制后被酶促形成的，在哺乳动物DNA中有5%的胞嘧啶被转变为5-甲基胞嘧啶。它只在胞嘧啶后边跟随一个鸟嘌呤(CpG)时产生。 最近的研究显示基因中胞嘧啶甲基化程度控制DNA的转录。低甲基化有助基因活动，人胚胎红细胞珠蛋白基因活性与基因启动子甲基化的逆转相关(右上图)。 胎儿的肝细胞在发育早期产生血红蛋白，其基因未甲基化，这些基因在成体组织中变为甲基化的。鸡的卵清蛋白基因在输卵管细胞中是未甲基化的，而在其它组织中这个基因是甲基化的。属器官特异甲基化的模式。 3. 哺乳动物X-染色体的剂量补偿(dosage compensation) 在动物中雌性每个细胞具有2个X-染色体, 而雄性只有一个X-染色体。X-染色体上有数千个基因是细胞活动所必须的。 在哺乳动物发现雌性细胞中只有一个X-染色体是有活性的，另一个转变为异染色质的，常常附着在雌性细胞核的核膜上，被称为巴氏小体。 这样在雌雄细胞中都只有一个X-染色体具有活性，是相等的，称为剂量补偿。 Marry Lyon(1963)首先研究这一现象, 并提出①在雌性哺乳动物发育早期2个X-染色体都有活性; ②随发育每个细胞中1个X染色体失活; ③失活是随机的, 或父本的, 或母本的; ④此过程是不可逆的, 一旦1个X-染色体失活, 其后代都是失活的。这个假说提供了在转录水平不同基因失活的极好说明. 二、通过RNA加工控制发育 在细菌中不同基因的表达能在转录、翻译和蛋白质降解的水平调节。在真核细胞中存在另一种调节水平，即在RNA加工水平控制。 1. 不均一的核RNA (heterogeneous nuclear RNA, hnRNA) 实验证明mRNA并不是真核细胞的初级产物, 存在一种核RNA (nuclear RNA, nRNA)，它比mRNA大得多，半衰期更短，大小变化广泛，称为不均一的核RNA。其分子具有大约5-19×103个核苷酸，mRNA只有2×103个核苷酸。海胆胚胎中mRNA的半衰期为 5小时，而nRNA仅为20分钟。nRNA的复杂性比相同细胞mRNA大得多. 2. nRNA加工控制早期发育 染色体组转录出比mRNA多得多的序列。因此大量分化控制是在转录后特异的mRNA前体加工中。 通过分离海胆囊胚的DNA，制备单拷贝DNA。实验发现囊胚细胞核的nRNA只结合15%单拷贝DNA，长腕幼虫的n