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第六章 典型发酵过程动力学 发酵过程分类 按照培养的方式分三种类型： 分批培养 补料分批培养 连续培养 第一节 分批培养 分批培养又称分批发酵，是指在一个密闭系统内投入有限数量的营养物质后，接入少量的微生物菌种进行培养，使微生物生长繁殖，在特定的条件下只完成一个生长周期的微生物培养方式。分批培养是一种非稳态的培养方法。 分批发酵的基本特征 反应物料一次性加入，维持一定的反应条件让其封闭进行，直到产物或细胞生成量达到一定要求后一次性释放培养物；反应器内物质组成随时间变化而变化， 分批发酵操作适合于多品种，小批量、发酵速度较慢的发酵过程，且能够经常进行灭菌，因此在目前发酵工业采用较多。 缺点：生产量小，不易控制，有害物质积累对细胞生长不利，底物或产物抑制 一、微生物生长动力学 微生物生长动力学就是要定量描述细胞反应过程中细胞生长或产物形成与基质消耗随时间的变化关系。建立细胞生长和产物形成的数学模型。 但由于细胞生长过程极其复杂，难以精确描述，所以需要合理简化，在简化的基础上建立物理模型，据此推出数学模型。 简化模型的内容 细胞反应动力学研究细胞群体的动力学规律，而不是细胞个体 确定论模型：不考虑个体差异，取其性质的平均值；概率论模型：考虑每个细胞间的差异 非结构模型：忽略细胞的组成成分变化；结构模型：考虑细胞的组成成分变化 均衡生长：各种成分成比例增长；非均衡生长：由于各种成分合成速率不同，各成分增加比例也不同 均一化模型：细胞与周围液相视为一相（不考虑物质传递的影响）；分离化模型：细胞与周围的液相不能视为一相，而是从培养液分离出来的部分（考虑细胞与周围液相的物质传递） 细胞反应的得率系数 3. 微生物的生长曲线 在分批培养过程中，随着微生物和底物、代谢产物的浓度等的不断变化，微生物的生长可分为停滞期、对数生长期、稳定期和死亡期四个阶段。 1）停滞期（适应期） 停滞期是微生物细胞适应新环境的过程。微生物细胞从一个培养基被转移至另外一个培养基中，细胞需要有一个适应过程，在该过程中，系统的微生物数量并没有增加，处于一个相对的停止生长的过程。接种物的生理状态和浓度是停滞期长短的关键。 2）对数生长期 处于对数生长期的微生物细胞的生长速度大大加快，单位时间内一定量细胞的数目或重量的增加维持恒定，并达到最大。此阶段生长比速为常数。为缩短适应期，常采用对数期的培养物做接种物。 指数生长方程： 在非对数期时μ 是不定的。 在对数期时其值最大用μm表示。将上式积分得： 、 分别为初始菌体浓度和生长t时间后的菌体浓度 在工业生产上，也常用菌体细胞质量加倍所需要的时间即倍增时间td来表示菌种生长活力的高低，一般是用指数生长期的td(td=0.693/ μm)来表示。大多数工业微生物菌种的倍增时间td在1~3小时。 3）减速期 由于微生物的大量生长，培养基中基质的浓度下降、有害物质积累而导致比生长速率下降。在减速期内，微生物生长符合一级方程，只是μ是变化的4）静止期 当细胞停止分裂，或细胞生长与死亡的速率达到平衡时便出现稳定期。在微生物生长的稳定期，细胞的重量基本维持稳定，但活细胞的数量下降。 5）死亡期 培养基中营养耗尽，代谢产物大量积累，细胞繁殖趋于停止，而死亡细胞越来越多，即活细胞数量显著下降。 4. 无抑制、单一限制性底物的细胞生长动力学Monod提出了在特定温度、pH值、营养物类型、营养浓度等条件下，微生物细胞的比生长速度与限制性营养物质的浓度之间存在如下的关系式： μm-----------最大的比生长速度 ρS------------限制性营养物的浓度 Ks-----------饱和常数，数值上等于μ=μm /2时的限制性营养物质浓度，它的大小表示了微生物对营养物质的吸收的亲和力。 Ks越大，表示微生物对营养物质的亲和力越小，反之越大，对于许多微生物来说，一般为0.1~120mg/L或0.01~3.0mmol/L，这表示微生物对营养物质有较高的吸收亲和力。 当限制性营养物质的浓度ρS很低的时候（ρSKs)， μ和ρS是线性关系， μ= (μm/Ks)ρS 随着营养物质的浓度增加，比生长速度也相应的增加， μ与ρS不成直线关系，当ρS Ks时μ≈ μm Monod方程与酶催化反应的米氏方程形式上是一样 的，因为微生物的生长可看作酶反应的粗略代表。 但所不同的是，米氏方程是应用酶反应理论推导得 到的，而Monod方程却是完全经验得到的。 将Monod方程两边取倒数可改写成下列形式 1/ μ=1/ μm + Ks/ μm(1/ρS) 以1/ μ为纵坐标，1/ρS为横坐标，