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日语医学论文:急性医実験におけるラットの手术法
急性実験におけるラットの手術法
目次
はじめに
実験を始める前に
麻酔の方法(吸入麻酔、麻酔薬投与)
カニュレーションの方法(気管、血管カニュレーション)
その他(筋弛緩薬投与および人工呼吸、実験終了後の処理)
参考文献
1.はじめに 実験で用いられるラットは、19世紀初期にヨーロッパ産ドブネズミの中から白色の変わり種として見つかったものが固定され、実験動物用に使われるようになったとされている。分類学的には哺乳動物網、げっ歯目、真鼠亜種、ネズミ科、クマネズミ属に属する1)。現在では多数の種類の系統が存在し、主な系統として近交系にACI、ALB、F344、LEW、SHR、TO、WM等、ミュータント系にはヌードラット、遺伝性黄疸、遺伝性白内障等、クローズドコロニーにはDonryu、Sprague Dawley、Wistar等、ハイブリッド系にはHORF1、LBNF1、LF344F等がある2)。 ラットは実験動物として取扱いやすく、広く使われている。我々の研究室でも主にラットを用い電気生理学的研究を行っている。そこで本稿では、麻酔下で行う急性実験の際の基本的な方法について述べる。
2. 動物実験を始める前に 近年、福祉的観点から動物実験に対する是非が問われ、また論文発表の際には各研究機関の倫理委員会の承認もしくは動物実験に関する基本指針にのっとった旨の記述を必要とする場合が多い。これまで「実験動物の飼育及び保管等に関する規準、昭和55年総理府告示」「International guiding principles for biomedical research involving animals. CIOMSS1984」「動物実験に関する指針、日本実験動物学会 1987」など倫理規範が示されている。1988年には「生理学領域における動物実験に関する基本的指針、日生誌51巻1号53頁」が日本生理学会より示された。動物実験を行う際にはこれらの指針を順守し、適正な実験計画および実験遂行に務めなければならない。その基本的事項のひとつとして、科学的な観点から最も適正な種属を選択するという項目がある。ラットを実験に用いる場合、その生理的な特徴を把握する必要がある。表1にラットの生理学的特徴を示す。
表1 ラットの生理学的特徴
体重 雄300~700g?雌200~400g(初生時体重5~6g) 性成熟年齢 9~10週 交配開始齢 9~14週 性周期(雌) 4~5日 妊娠期間 21~22日 産仔数 6~15匹 離乳年齢 18~23日 食餌量 15~20g/日/匹(10g/100g体重/日) 飲水量 4~7ml/日/匹(8~11ml/100g体重/日) 寿命 2~3年 体温 38.2(37.8~38.7)℃ 開眼日齢 10~12日 心拍数 352(260~450)回/分 血圧 98(82~120)mmHg 総血液量 6.41(5.75~6.99)ml/100g体重 呼吸数 85.5(66~114)回/分 呼吸量 0.86(0.60~1.25)ml/回、73(50~101)ml/分 赤血球数 8.9(7.2~9.6)×106/mm3 ヘマトクリット値 46(39~53)% 赤血球容積 55(52~58)mm3 白血球数 総数:14(5.5~25.0)×103/mm3リンパ球:73(65~84)%好中球:22(9~34)%単球:2.3(0~5.0)%好酸球:2.2(0~6.0)%好塩基球:0.5(0~1.5)% 血小板数 1240(1000~1380)×103/mm3 血漿 pH :7.4±0.06CO2 :22.5±4.5mM/lCO2圧 :40±5.4mmHg 尿 pH :7.3~8.5比重 :1.04~1.07 1)、2)、5)より引用
動物は愛情を持って静かに取り扱うことが大切である。動物の扱いが不適切であると動物は狂暴になってしまい、実験者が指をかまれたり、実験処置も不正確になりやすい2)。動物に不安を与えたり、動物が嫌がること(たとえば動物の尾をつかんで長時間ぶら下げているようなこと)をしてはならない3)。ラットをつかむときは、母指と中指をラットの背部から腋下にまわして持ちあげる。右手の場合、示指をラットの右前肢の前方におき、中指とで右前肢をはさむようにすると持ちやすい。1~2週齢のものでは背部の皮膚をかるくつまんで持ちあげるようにする4)。保定者はリラックスして、手にはあまり力を入れずに、肝心の部分はしっかりと保定してラットをつかむことが重要である。
3. 麻酔の方法 麻酔は実験動物の不安や苦痛を緩和し、
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