高效液相色谱法及超临界流体色谱法12.pptVIP

现代分析技术 第十章 第十章 高效液相色谱法及超临界流体色谱法 10.1 概述 10.2 HPLC的基本原理 提高HPLC的柱效的措施 10.3 HPLC的类型 I 液液分配色谱法 Liquid Liquid Partition Chromatography, LLPC 流动相类别 II 液固吸附色谱法Liquid Solid Absorption Chromatography, LSAC III 离子交换色谱法 Ion Exchange Chromatography, IEC IV 离子对色谱法 Ion Pair Chromatography, IPC V 离子色谱法 Ion Chromatography, IC VI 空间排阻色谱法 Size Exclusion Chromatography, SEC VII 亲和色谱法 Affinity Chromatography, AC 10.4 高效液相色谱仪 高压输液系统 色谱柱 色谱填料 HPLC检测器 DAD 1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，得到三维立体谱图 荧光检测器Fluorescence detector 电化学检测 (电导检测、安培检测) 示差折光检测器 differential refractive index detector 蒸发光散射检测器 evaporative light-scattering detector, ELSD 10.5 超临界流体色谱 supercritical fluid chromatography, SFC 超临界流体的特性 SFC的固定相和流动相 超临界流体色谱仪器 SFC中的压力控制 SFC的应用 I SFC的发展现状 超临界流体萃取 Supercritical Fluid Extraction, SFE 超临界萃取的特点 10.6 实验技术 c. 梯度洗脱 DAD可以得到三维的 色谱光谱图像 * 灵敏度高，选择性好，灵敏度比UV高10~1000倍； 要点：具有荧光或能形成荧光配合物 分析对象：氨基酸、维生素、 蛋白质等能发荧光的物质。 * 原理：两个对电极测量样品中离子 型溶质的电导，由电导的变化测定 溶质的浓度。 要点：死体积小，灵敏度高，pH7不够 灵敏。 * 原理：利用待测物流入反应池时在工作电极表明发生氧化还原反应，两电极间有电流通过，电流大小与待测物质浓度成正比。 要点： 具有电活性物质 原理：样品组分的折射率与流动相折射率有差异，当组分洗脱出来时，会引起流动相折射率的变化，这种变化与样品组分的浓度成正比。 要点：灵敏度低，不能用于梯度洗脱 * * 流出液?雾化器雾化?加热漂移管加热?溶剂蒸发?激光束照在溶质颗粒?产生光散射 散射光强只与溶质颗粒大小和数量有关。 要点：通用型质量检测器， 可用于梯度洗脱 分析对象：适合于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的样品的检测 * 定义： 以超临界流体为流动相的色谱分析法，具有GC和HPLC的优点，适于分析GC不能分析的高沸点、低挥发性的试样。 超临界流体： 在高于临界压力与临界温度时，物质的一种状态。性质介于液体和气体之间。 超临界流体既不是气体，也不是液体，而是一种介于二者之间的一种对分离很有利的流体。 * 1）性质介于液体和气体之间； 气体的低黏度，传质阻力小，可以快速高效的分离； 液体的高密度，适于低温下分离热不稳定、分子量大的物质； SFC的扩散系数、粘度和溶解力都是密度的函数，可通过改变SFC的密度调节组分分离， 超临界流体的密度与压力有关。 传质阻力小 适于低温 * SFC色谱柱：填充柱 ：颗粒dp: 3~10 μm, Lcol: 25 cm,固定液膜厚： 几mm 交联毛细管柱：颗粒 df: 0.05 ~ 1 μm , Lcol: 10 ~ 20 cm,固定液膜厚0.05 ~ 1 μm SFC的固定相：固体吸附剂（硅胶）；键合到毛细管壁上的高聚物 要点：CO2应用最广泛；无色、无味、无毒、易得、对各类有机物溶解 性好，在紫外光区无吸收； 缺点：极性太弱；加少量甲醇等改性； SFC的流动相： * 与HPLC差别： HPLC只在柱入口加压，而SFC整个都处于高压下，使流动相处于高密度状态； SFC必须装有毛细管限流器，以实现限流器两端相的转变 高压泵 无脉冲的注射泵，通过电子压力传感器和流量检测器，计算 机控制流动相的密度和流量； 检测器 可采用HPLC的检测