分子荧光—培训课件.ppt

（2）第二区 可见光激发 荧光强度低于紫外激发 420/525nm 450/525nm 465/525nm 这些发射可能是由于： 核黄素或它的尿代谢物 (7一羟基核黄素或8-羟基核黄素) （3）第三区 波长较长的可见光区荧光 荧光强度最低 尿中卟啉 400/600nm 400/650nm 此二峰与尿卟啉和粪卟啉的荧光峰完全相对应。 一些疾病与尿中荧光化合物的数量有关，尿液的总荧光光谱图可用于某些疾病的诊断。 论文题目： 总荧光光谱法在： 临床诊断中的应用 生物医学中的应用现状 液相色谱中的应用 第四章 分子荧光分析新技术 §4.1 分子荧光光分析法概论 一．定量分析 A =-lgT =εbc T = F ∝( ) F =Φf· 若用级数展开，略去高次项，得 F = 2.303Φf kC k = εb Φf称为荧光的量子产率，Φf 二．影响发光强度的因素 Φf = S* S kc kf kx T kp kc′ 讨论 1.?kf主要取决于分子结构，受环境影响较小。 εmax 可作为kf的定性度量 εmax大，A大，kf大 例如 π→π* ε ∨ n→π* ε 具有多重共轭双键的分子发射的荧光较强 2. kc受环境影响最为强烈(无辐射去活速率常数） T升高，分子碰撞的几率增加，kc变大 3. kx为内交联的速率常数 kx既受分子结构的影响，也在一定程度上受环境的 影响。 kx：（1）对π*→n，kx＞kf 对π*→π，kx≈kf? （2）溶剂的极性影响分子跃迁类型 喹啉在苯中 π*→n 在极性S π*→π 喹啉在苯、乙醇、水中的Φf分别为1，30，1000 (1) ? kx依赖于S*→T的距离 距离越小，kx越大 (2) ? 重原子效应 在含有π轨道上的分子引入重原子之后，kx变大 氟苯 Φf 0.16 氯苯 Φf 0.05 溴苯 Φf 0.01 碘苯 Φf 0 (3) ? 不成对自旋的顺磁物质，也发现会增大系内交联速率 例如：锌卟啉二甲酯螯合物具有中等强度的荧光和磷光, 铜卟啉二甲酯螯合物的荧光减弱，磷光增强 三．分子发光与结构的关系 要使分子产生荧光，则分子结构能吸收 UV-Vis辐射, 且要有较高的荧光效率。 (1)若分子吸收UV-Vis辐射能力越强，发光越 强； (2)能强烈发光的分子几乎都是经过π→π* 跃迁，具有共轭双键、刚性较强的平面和 多环结构的分子易于发光。 取代基对分子发光有显著影响 （1） 给电子基团常使荧光增强 如－NH2，－OH （2） 吸电子基团使荧光减弱或熄灭 如－COOH，－NO2，－N＝N－ 刚性强的分子Φf大 如环的封闭作用使分子刚性增强 芴 Φf 1.0 联二苯 Φf 0.2 有机螯合剂与金属离子形成配键时， 刚性 增强 8-羟基喹啉与Zn Φf