2）发酵过程中菌体生长速率.PPT

和分批培养相比，连续培养的优点有： ① 可以维持稳定的操作条件，所以产品质量相对稳定； ② 能实现机械化和自动化，降低了劳动强度，减少了染菌机会； ③ 减少设备清洗、准备和灭菌等非生产时间，提高了设备利用效率； ④ 容易对过程进行优化。 连续培养法的缺点： ① 需要专门仪器，投资高； ② 由于是开放系统，加上反应周期长，容易染菌； ③ 在长周期连续培养中，菌种易于退化； ④ 营养物的利用率一般低于单批培养； ⑤ 新加入的培养基与原有的培养基不易完全混合，影响培养和营养物质的利用。 连续培养器的类型同样很多，如下表： 连续培养重要特征是使微生物增殖速度和代谢活性处于稳定状态。连续培养方法按控制方法可分为恒浊器法和恒化器法。 操作：通过光电管检测恒浊器中培养物的吸光值，M流速可自动调节，使培养物浊度或细胞密度保持在一个预先设定值（内控制 ） 。 原理：维持细胞（或菌）浓度不变（反映细胞浓度的浊度）。 特点：基质过量，菌以最高速率生长；但工艺复杂，烦琐。主要应用于工业生产。 （1）恒浊培养 （2）恒化培养 概念：利用恒化器进行连续培养时，向其中加入无菌新鲜M的速度（外控制 ）与排出含菌培养液的速度相同，将M中的某种生长限制因子（如碳源、氮源、生长因子、无机盐等）的浓度控制在恒定范围。 原理：恒化器内M.B生长速度由向容器中加入新鲜M的速度决定，最终细胞浓度依赖于限制性营养物的浓度。 特点：维持营养成分的低浓度，控制微生物生长速率（低于最高速率）。主要应用在实验室。 营养物质更新的速度叫稀释率（D） 3.补料分批发酵法（fed-batch fermentation ） 又称半连续发酵法或流加发酵法 ▲定义：在微生物的分批培养过程中，向发酵罐中间歇或连续地补加一种或多种无菌的限制性底物，直到培养结束后才排出培养液的一种发酵操作方式。 流加发酵操作能使发酵系统中保持低的营养物浓度。 一方面可解除底物的抑制、产物的反馈抑制和Glc分解阻遏效应； 另一方面又避免了培养基积累某些有毒代谢物，而且还可以起到稀释发酵液以降低粘度的作用。 由于流加发酵可以延长细胞对数生长期和平衡期的持续时间，增加生物量和细胞代谢产物的积累，因此发酵工业中广泛采用这种培养方式进行生产。 GSH的分批发酵过程 高浓度葡萄糖恒速流加下GSH发酵过程 按补料方式分： 连续补料、不连续补料和多周期补料等； 按补料速率分： 快速补料、恒速补料、指数速度补料和变速补料； 按反应器中发酵液体积分： 变体积补料和恒体积补料； 按反应器数目分： 单级补料和多级补料； 按补加的培养基分： 单一组分补料和多组分补料等。 补料分批发酵的类型 第三节 微生物发酵动力学 一、分批发酵动力学 1. 分批发酵的不同阶段 （1）迟滞期 适应新环境 X几乎没有增加 细胞个体增大 合成有关水解酶来利用营养物质 迟滞期长短与……有关。 （2）对数生长期 活力旺盛 快速分裂繁殖 显示对数生长 在此阶段，培养基成分虽然发生改变，但细胞的生长速率维持恒定且达到最大。当培养基中营养物过量时，生长速度与营养物浓度无关： 积分得： 如果细胞数量倍增，X2＝2X1，则所需要的倍增时间td 为： 一般说来，细菌的倍增时间为15 ~ 60 min，酵母为45 ~120 min，霉菌为2~8 h。p155表6-6 （3）稳定期 营养物消耗或有毒物质形成，生长速度下降直至停止。这时细胞增加速度和死亡速度达到平衡，进入稳定期。DCW基本恒定，细胞性能相对稳定。 二次生长 由于细胞的自溶作用，胞内的一些物质可以作为尚存活细胞的营养物质而继续缓慢地生长 （4）衰亡期 能量耗完和有毒物质积累，细胞开始自溶而死亡。时间长短取决于M.B的种类和M的类型。 二次生长的生长曲线 时间 菌体浓度 延迟期 对数生长期 稳定期 衰亡期 延迟期： 对数生长期: 稳定期： ; 衰亡期: ★（1）Monod方程式 1942年，Monod最先发现，μ与 [S]符合以下方程： —— 菌体最大比生长速率 h-1 [S] —— 生长限制性基质的浓度 g/L或mol/L —— 饱和常数 g/L或mol/L 2. 微生物分批培养的生长动力学 Monod方程式与酶学中的米氏方程十分相似，但属于经验式。 Monod方程式是目前应用最为普