微生物代谢的人工控制—培训课件.pptVIP

改变能量代谢途径 除了通过相关代谢途径的基因, 改变能量代谢途径或电子传递系统也可以有效改变代谢流。 重组木糖发酵菌株 SaccharomycescerevisiaeTMB3001可以在含木糖的培养基上生长,但其用木糖产乙醇率很低, 一个重要原因就是菌体内氧化还原作用辅因子的不平衡 。因此 Thomas TMB3001 CPB. CR4两种 Saccharomycescerevisiae菌株,通过 gdh1的敲除和 GDH2的过表达,这二者不仅能发酵木糖产乙醇,而且被修饰了还原代谢系统,C13标记葡萄糖结果显示氨同化作用从利用 NADPH变为 NADH依赖的,同时 CPB.CR4菌株的乙醇产率提高了25%。 二、扩展代谢途径 通过基因工程手段在宿主菌中克隆、表达特定基因(簇)等,使原有代谢途径进一步向前或向后延伸,从而可利用新的原料用于合成目标产物或产生新的末端代谢产物。 外源基因的导入 ,通过扩展代谢途径可使宿主菌能够利用自身的酶或酶系消耗原来不消耗的底物。Winter 等 克隆假单胞菌的单加氧酶基因并在大肠杆菌中表达 ,获得的工程菌可有效降解三氯乙烯 ,降解力远大于原始菌株 ,可使三氯乙烯在水中的浓度降至 1/1000。这说明关键酶转入不同的调控环境中其活性可大大增加。 三、转移或构建新的代谢途径 转移代谢途径 构建新的代谢途径一般是指引入外源基因(簇)来改造和修饰代谢网络,使细胞从不能合成某种代谢产物转变为能够合成此代谢产物。 在真氧产碱菌(Alcaligenes eutrphus)一些细菌中于限制生长和碳源过量条件下,在细胞内大量累聚羟基丁酸(PHB)或聚羟基烷酸(PHA) ,这些聚合物都具生物降解性能。为了利用大肠杆菌生产 PHB ,有人将真氧碱菌的 PHB操纵子(包括编码 PGB 多聚酶、硫解酶和还原的基因)克隆到大肠杆菌中,所构建的工程菌和真氧产碱菌一样,当N源耗空时能积累大量 PHB ,可达细胞总量的50%。 构建新的代谢途径 A）转移代谢途径,即将多个特定代谢途径中的相关基因(簇)转移到无这些基因的菌株中,从而达到使其能合成新的目标产物的目的; Hopwood 等 将放线菌红素(Actinorhodin)的生物合成基因导入 Granaticin 和 Medermycin产生菌中 ,所构建的工程菌可积累具有新结构的抗生素Dihydrogranatirhodin 和 Mederrhodins A。 b）将无关的代谢途径相连,形成新的代谢途径,从而合成新的目标产物。 代谢工程的研究目的是要改进微生物的代谢,增加工业生物产品的收率及生产能力。 而如何从本质上把握生物代谢网络的调控规律，最终做到可以定量预测基因改变和环境变化后，生物代谢网络的变动规律，从而为优化生物代谢功能、提高研究和生产效率提供坚实的理论支持和强大的技术后盾，是现代系统生物学的一个待解难题，也是代谢工程的主要任务。 第五节微生物代谢工程的应用最新进展 1、微生物代谢工程的优缺点 优点：方向性强、目标明确、效率高、技术手段先进、过程可控性好和重现性好等优点（微生物代谢工程在修饰靶点选择、实验设计以及数据分析方面占有绝对优势）； 主要缺点是对相应微生物的代谢和遗传机理知识以及基因操作工具的依赖性太强。 应用领域主要包括: (1)改善或提高微生物的某种性能; (2) 产生宿主细胞本身不能合成的新物质; (3)生产非天然的新物质如新型药物; (4) 对环境有害物质的降解; (5)阻断或降低副产物的生成; (6)提高菌体对环境的适应能力; (7)提高代谢产品生产速率和生产能力; 2、微生物代谢工程的最新应用领域 药物生产的代谢工程与定向进化 ; 可再生资源利用的代谢工程; 用代谢工程改进染料生产及使用; 乳酸菌的代谢工程; 微生物塑料工厂的过程设计—PHA 的代谢工程; 1 ,3-丙二醇、次生代谢物及类黄酮的代谢工程;通过3 种生物(植物、酵母和大肠杆菌) 的6 个基因用代谢途径工程使E.coli成为生产抗疟疾药物(青篙素) 的“绿色工厂” 部分成熟的研究举例 * 微生物代谢的人工调控 第一节 微生物代谢的人工控制简介 第二节 发酵工程流程 第三节微生物代谢的人工调控方法 第四节微生物的代谢途径修饰 改变代谢途径 扩展代谢途径 转移或构建新的代谢途径 第五节微生物代谢途径修饰的应用 第一节 微生物代谢的人工控制简介 微生物代谢的人工控制 一个崭新的科学领域,它综合了分子生物学、微生物学、分子反应动力学、生化工程等多个学科领域的最新成果,是目前国内外研究的热点； 代谢工程被视为继蛋白质多肽单基因表达的第一代基因工程、基因定向突变的第二代基因工程(即蛋白质工程)之后的第三代基因工程。 人工控制改造后自身效率提高实例