2013免疫学与临床诊断基础—培训课件.pptVIP

* 电化学发光免疫分析ECLIA 以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应，它包括电化学和化学发光两个过程 在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原)，用三联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标本与相应的抗原 (抗体)发生免疫反应后，形成磁性微粒包被抗体-待测抗原-三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸入流动室，同时引人TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度与待测抗原的浓度成正比 * 电化学发光免疫分析示意图 * 电化学发光免疫测定示意图 * 标记磁颗粒在电场中发光工作示意图 * 免疫分析的未来 过去 症状的处理 没有标准的准则 现在 标准化的诊断和治疗的步骤 减少操作的可变性 和不依从性 着重单个个体 明天 人群疾病的花费和因果关系 确认一些医学措施所带来的益处 风险评估 教育项目预防发病率 展望 控制发病率(控制因某病而死亡) 紧急监护 疾病管理 人群健康管理 更有效合理 的管理 疾病的有效管理已成为卫生保健系统机制改变的基石， 同样的将推动所有的决定和因此而产生的行动。 * * 向您致以衷心的感谢和 诚挚的祝福！ * RIA的基本原理 放射性同位素标记的抗原（“标记抗原”）和非标记抗原（待测抗原）同时与数量有限的特异性抗体之间发生竞争性结合（抗原－抗体反应）。由于标记抗原与待测抗原的免疫活性相同，对特异性抗体具有同样的亲和力，当标记抗原和抗体为数量恒定时，待测抗原和标记抗原的总量大于抗体上的有效结合点时，标记抗原-抗体复合物的形成将随着待测抗原量的增加而减少，而非结合的或游离的标记抗原则随着待测抗原数量的增加而增加（竞争结合反应），因此测定标记抗原-抗体或标记抗原即可推出待测抗原的数量。通过绘制结合曲线，即可计算出病人血清之中待测抗原的确切数量 抗原的放射性标记常常是利用碘发射γ射线的放射性同位素与酪氨酸结合来实现的。 * 放射免疫技术 酶免疫技术 发光免疫技术 三大经典标记技术 * 放射免疫分析(Radioimmunoassay，RIA) * 基本原理 应用放射性同位素标记的抗原，通过免疫反应测定样本中抗原的技术 标记抗原Ag*和非标记抗原Ag对特异性抗体Ab的竞争结合反应。 反应式为： 在这一反应系统中，作为试剂的标记抗原和抗体的量都是固定微量的，而受检的非标记抗原量是不固定的 用于制备标记抗原的 抗原必须是高纯度的。 * 结合相 游离相 标记抗原（固定微量） 抗体（固定微量） 抗体（固定微量） 标记抗原（固定微量） 非标记抗原（被测物） * 常见RIA标记物 1、常用的放射性同位素有两大类： γ射线： 131I、125I、57Cr和60Co β射线：14C、3H和32P 2、使用最广泛的是：125I ①性质活泼、易制备标记物 ②对被标记物的免疫活性影响小 ③测量方法简便、已推广 ④半衰期较长、核素丰度高 β液闪仪 γ计数器 * 特点分析 优势：将放射性同位素测量的高度灵敏性、精确性和抗原抗体反应的特异性相结合；敏感度可达ng-pg水平；较宽的检测线性范围 局限：标记物的半衰期短；试剂效期短；检测结果的重现性差；每次检测都要做标准曲线；分析的反应时间长，半天-2天；发射性污染有害；很难实现自动化检测；竞争性反应为相对值而非绝对值（部分参加反应） 应用：常用于检测激素类和肿瘤标志物等微量物质，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、吗啡、AFP、CEA、PSA等。（1959年由Yalow和Berson首先用于糖尿病患者血浆胰岛素含量的测定） 趋势：现在免疫分析技术都在朝着非同位素标记免疫分析的方向发展，但无法完全取代RIA * 酶免疫技术(enzymeimmunoassay,EIA) * 酶免疫技术 将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合。敏感度可达1ug/L,甚至1ng/L。常用的标记物有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。 常用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）测定可溶性抗原或抗体，用酶免疫组化法测定组织中或细胞表面的抗原。 酶联接免疫吸附剂测定(ELISA)方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原或抗体与某种酶联接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 * 均相型（homogenous） 非均相型（heterogeneous） 酶免疫测定根据抗原抗体反应后是否要