中药天年饮对衰老大鼠卵巢端粒酶活性的影响论文.docVIP

　　中药天年饮对衰老大鼠卵巢端粒酶活性的影响论文 谢红林 王陪 李皓岩 薛景凤 【摘要】 目的观察中药天年饮对衰老大鼠卵巢抗氧化能力和端粒酶活性的作用。方法D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老的大鼠模型，并给予天年饮灌胃。分别采用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法、PCR-ELISA法检测卵巢组织SOD活性、MDA含量和端粒酶活性。结果天年饮可明显提高衰老大鼠卵巢组织SOD和端粒酶活性，降低MDA含量，天年饮用药组与衰老模型组比较差异显著（P＜0.01或P＜0.05）。结论中药天年饮可提高衰老大鼠卵巢抗氧化能力和端粒酶活性，具有延缓卵巢细胞衰老的作用。 【关键词】 天年饮 衰老 端粒酶 抗氧化 卵巢 1988年Meites［1］提出，在衰老的过程中，神经-免疫-内分泌网络起着重要作用，而下丘脑-垂体-性腺轴（HPG轴）是其重要组成部分.freelg/kg给药，1次/d，连续40 d）制作亚急性衰老的动物模型。模型组大鼠造模成功后不再做任何处理；用药组大鼠造模成功后每天用天年饮灌胃，共30 d；阴性对照组大鼠在造模成功后每天灌胃生理盐水，量及灌胃时间同用药组大鼠。 1.2 药品与试剂 天年饮由炙何首乌、怀牛膝、肉苁蓉、淫羊藿、丹参、茯苓等6味中药组成，熬制后每毫升含生药1.5 g，按16.2 g/kg灌胃给药。D-半乳糖(D-gal)，北京化学试剂公司(批号020402)；端粒酶活性检测试剂盒，德国Roche公司；超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）检测试剂盒，南京建成生物工程研究所。 1.3 端粒酶活性的检测 1.3.1 标本制备各组分别随机选取8只大鼠，断头处死，迅速取出双侧卵巢称重，生理盐水漂洗后，4℃，10 000 r/min离心1 min，弃上清液；将沉淀组织液氮冷冻后研磨，加入洗液洗涤，同上条件离心1 min；沉淀加入裂解液悬浮，冰浴30 min，4℃，13 000 r/min离心20 min，取上清液-70℃冰箱保存。 1.3.2 检测端粒酶活性采用德国Roche公司的端粒酶活性检测试剂盒（Telo TAGGG Telomerase PCR ELISA PLUS）,按试剂盒说明进行操作，包括端粒扩增、杂交及ELISA检测，分别于检测波长450 nm和参考波长690 nm处检测吸光度，并根据下面公式计算结果： RTA=(AS-ASO)AS,IS(ATS8-ATS8,O)/ATS8,IS×100 1.4 卵巢组织SOD活性、MDA含量的测定取各组余下的8只大鼠，断头处死，迅速取双侧卵巢，称重后加入生理盐水冰浴下匀浆，4℃、10 000 0 r/min离心10 min，取上清液-70℃冰箱保存。分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法按试剂盒说明进行操作，检测卵巢组织中的SOD活性和MDA含量。 1.5 统计处理 采用SPSS11.0统计软件，以方差分析进行统计处理。 2 结果 2.1 端粒酶活性 各组大鼠卵巢端粒酶活性见表1。衰老模型大鼠卵巢端粒酶活性明显低于正常大鼠（P＜0.01）；天年饮可抑制衰老大鼠卵巢端粒酶活性的降低，天年饮用药组大鼠端粒酶活性明显高于衰老模型组大鼠（P＜0.01）。 表1 各组大鼠卵巢端粒酶活性（略） 与模型组比较，*P＜0.01；与天年饮用药组比较，#P＜0.01；n=8 2.2 SOD活性和MDA含量 各组大鼠卵巢组织SOD活性和MDA含量见表2。 与正常大鼠比较，衰老模型大鼠卵巢SOD活性明显降低、MDA含量明显升高；中药天年饮可提高衰老大鼠卵巢SOD活性、降低MDA含量。 表2 各组大鼠卵巢组织SOD活性和MDA含量（略） 与正常组比较，*P＜0.01；与衰老模型组比较，#P＜0.01，##P＜0.05；n=8 3 讨论 绝经期妇女产生更年期症状的主要原因是卵巢功能减退，失去排卵及分泌雌激素、孕激素的功能。卵巢分泌激素减少，导致围绝经期中老年妇女的内分泌、免疫功能、骨代谢、自由基代谢等的显著改变，出现骨折、感染、癌症和自身免疫性疾病的几率增高以及老年痴呆症发病率增加（女性发病率为男性的3～4倍）等临床特征，对中老年妇女的健康造成了很大影响。机体在代谢中消耗的氧，2%～5%变成活性氧，如超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢等，而线粒体是产生活性氧的主要场所。在正常生理情况下，体内存在清除自由基的防御系统，包括SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等，还有一些抗氧化物质VE，VC等。由于这些酶类及抗氧化物质的存在，使体内的活性氧处于生成与消除的平衡状态，不会对机体造成损伤。随着年龄的增长，这些抗氧化防御体系活性降低，清除自由基能力下降，使体内活性氧生成过量；过量的活性氧可以攻击位于线粒体内膜上的脂类、蛋白质和mtDNA，影响线粒体的功能，导致细胞