医学科研基础酶学2011.9.ppt

关于酶学的诺贝尔奖 1907年 “没有酵母细胞的醇发酵” 1929年 “辅酶I（NAD+）的发现” 1931年 “发现呼吸酶的性质和作用方式” 1946年 “脲酶结晶并具有蛋白质的所有性质” 1947年? “发现糖代谢中的酶促反应” 1955年 “过氧化酶的研究” 1957年 “核酸酶以及核酸辅酶的研究” 1959年 “DNA和RNA聚合酶” 1965年 “研究有关酶和细菌合成中的遗传调节机构” 1972年 “核糖核苷酸酶的活性区位研究” 1975年 “酶催化反应的立体化学” 1978年 “发现限制性内切酶以及在分子遗传学方面的 应用” 1989年 “核酶（ribozyme)的发现” 2009年 “端粒和端粒酶是如何保护染色体的” 第二章 酶活性测定 Measurement of enzyme activity 第三章 酶实验中的酶动力学 Kinetics of enzyme-catalyzed reactions （一）米氏方程式及推导 米氏方程式的推导 第四章 酶耦联测定法 Enzyme Coupling Method 第五章 别构酶 Allosteric Enzyme 平衡透析实验可提供Scatchard作图的数据。 限制的条件： 1.酶蛋白只与一种配基S结合； 2.S不能被酶催化形成产物。 别构酶研究的一些方法 酶动力学研究中所观察到的协同作用行为 在配基结合时所观察到的协同作用行为 配基分子结合部位是否不同于活性部位 当结合配基时是否发生构像变化及确定变化的机制 酶分子中亚基的组成形式 第六章 同工酶 Isoenzymes 第七章 抗体酶 Abzyme 第八章 模拟酶 Enzyme Mimics 第九章 基因工程中的工具酶 The Treat Enzymes of Gene Engineering 同工异源酶：来源不同，但能识别和切割同一位点 同源粘性末端：用同一种限制酶切割的异源DNA片段产生相同的粘性末端 同尾酶：有些限制性内切酶识别序列不同，但酶切后可以产生相同的粘性末端 常用限制性核酸内切酶的特性 T４ DNA连接酶用于互补粘性末端和平端DNA分子之间的连接。 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 具有5→3的聚合酶活性， 5→3外切酶活性, 3→5的外切酶活性。 逆转录酶或者反转录酶（reverse transcriptase）是以mRNA为模板合成互补DNA即cDNA，用于组建cDNA基因文库。 以RNA为模板合成DNA 5→3合成方向 无外切酶活性 T４多核苷酸激酶（T4 polynucleotide kinase)能催化ATP的γ-磷酸转移到DNA或RNA的5端羟基上。 用于： 放射性磷标记DNA链的5-末端 使缺少5-端磷酸的DNA磷酸化，用于连接反应 碱性磷酸酶简称AKP，此酶能特异的切除DNA或RNA 5-端的磷酸产生5-端羟基以防止载体的自身连接。 末端脱氧核苷酸转移酶（TDT）能催化单核苷酸转移到DNA的3 -端的羟基上。 重要的工具酶 复习题 名词解释：不可逆性抑制，底物抑制，别构抑制剂，酶的自杀性底物，酶的激活剂，酶偶联的定法， 酶的提取典型的抽提液由哪些组分组成？ 酶的提取及纯化的注意事项。 列举至少五种酶的纯化方法。 酶的纯度指标鉴定。 什么是对照实验？简述其类型及方法。 酶纯化过程中实验记录的项目。 酶纯化过程中的注意事项。 酶的分子量测定方法。 酶活力测定方法类型及特点。 写出米-曼式方程式并简述Km的意义。 何为酶促反应初速率？反应时间、酶的浓度、底物浓度及反应的平衡常数与初速率有何关系？ 简述双分子反应的类型及机制特点。 简述可逆性抑制的动力学特点。 如何设计实验检验抑制类型是否可逆？ 列举基因工程中重要的工具酶及其作用。 BamH I G GATCC Bgl I A GATCT AvaⅠ XhoⅠ GTCGAC SalⅠ Streptomyces albus Subspecies pathocidicus 白色链球菌 SalpⅠ CTGCAG PstⅠ Providencia stuartii 164 普罗威登细菌 HsuⅠ AAGCTT Hind Ⅲ Haemophilus influenzae 流感嗜血菌 GAATTC EcoRⅠ Escherichia coli RY13 大肠杆菌 ACATCT Bgl Ⅱ Bacillius globigil 球芽孢杆菌 Bgl Ⅱ MboⅠ BstⅠ GGATCC BamHⅠ Bacillus amyloliquefacien