第一章植物组织培养的试验设建设和离体操作技术.pptVIP

第一章 植物组织培养实验室的建设和离体操作技术 目 录 第一节 植物组织培养的概述 第二节 植物组织培养实验室的建设 第三节 培养基 第四节基本操作技术 第一节 植物组织培养的概述 植物组织培养的几个基本概念 植物组织培养的分类 植物组织培养的发展历史 植物组织培养的应用 一、植物组织培养的概念 植物组织培养（Plant tissue culture） 通过无菌操作，把植物体的器官、组织、细胞甚至原生质体，接种于人工配制的培养基上，在人工控制的环境条件下进行培养，使之生长、繁殖或长出完整植株的技术和方法。用来培养的材料即外植体通常是离体的，所以又叫植物离体培养(plant in vitro culture)。 外植体 ( Explant ) 从活体上切取下来用于培养的 那部分组织、器官或细胞。 (totipotency)：一个生活细胞具有的产生完整生物个体的潜在能力称之为细胞的全能性（植物组织培养的理论基础） 生物体内的细胞为什么没有表现出全能性？而是发育成各种组织器官？ 基因在特点的时间和空间条件下选择性表达的结果。 在什么条件下植物细胞表现出全能性？ 离体条件下，在一定的营养物质、激素和环境条件下。 脱分化(dedifferentiation) ：一个成熟细胞转变为分生状态的过程。 去分化(redifferentiation) ：离体培养的植物组织和细胞形成的处于脱分化状态的细胞（愈伤组织），再度分化成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至最终再生成完整植株的过程。 二、植物组织培养的分类 培养方式 培养过程 培养材料 1 . 根据培养方式 固体培养（Solid culture ） 液体培养（Liquid culture ） 液体培养又有液体悬浮培养与静置培养之分。 固液培养（Solid- liquid culture ） 看护培养（ Nurse culture ） 饲喂层培养 (Feeder layer culture) 微室培养 (Microchamber culture) 最常用的是固体培养和液体培养，它们相比，各自的优缺点表现为： 固体培养 优点：通气性较好，若有污染，只污染局部 缺点：使培养材料与培养基接触不充分，有毒物质易积累。 液体培养 优点：有利于培养材料与培养基充分接触且有毒物质不易积累。 缺点：一旦污染，则材料全部污染，且通气性不好。 看护培养：是指在一个锥形瓶中，先加入一定体积的固体培养基，在其上放一块几毫米大小的愈伤组织块，再在其上放一张无菌滤纸并让其充分吸收从愈伤组织里渗透出来的培养基成分，然后将已分离好的单细胞接种到滤纸表面进行培养。 饲喂层培养：即作饲喂层的细胞经射线照射后，核失活但细胞存活，再将这种细胞用平板技术制成一琼脂(糖)平板，即饲喂层，然后将离体单细胞以液体浅层或平板技术铺在饲喂层上进行培养。 微室培养：是用条件培养代替看护培养，将细胞置于微室中进行培养的一种方法。 显著优点：可以连续进行显微观察。 主要用于花粉培养、单细胞培养和原生质体培养。 2 根据培养过程 初代培养(Primary culture) 从活体植株上切取下来进行的第一次培养。 继代培养（Subculture） 经过初代培养的材料，转移到新鲜培养基上进行培养的过程。 3. 根据培养材料(外植体) 组织培养 器官培养 胚胎培养 细胞培养 原生质体培养 （1）组织培养（Callus culture） （2）器官培养（Organ culture ） 包括根、茎、叶、花器官及其原基的培养(含根、茎段和花药等) 。 (3)胚胎培养（Embryo culture） 主要是对较小且未成熟的胚进行培养，研究胚胎的发生及影响胚生长的因素，特别是所需有机营养成分的研究。 （4）细胞培养（Cell culture） 离体细胞或细胞团的培养，可应用于生产某些有用成分和次生物质，单细胞培养还可用于取得单细胞无性系，进行突变体的筛选。 （5）原生质体培养（Protoplast culture） 原生质体培养是对去除细胞壁的裸露的细胞进行培养，由于其易于摄取外来遗传物质、细胞器及病毒、细菌等，所以可用于体细胞杂交或外援基因的导入研究。 1952-1953年： 美国科学家Steward F.C. 用胡萝卜根的细胞悬浮培养，发现单个细胞能象受精卵发育成胚一样的途径，发育成完整植抹。证实了植物细胞全能性学说。 1952年：Morel和Martin首次报道茎尖分生组织的离体培养，获得无病毒大丽花植株。 1954年：Muir将烟草愈伤组织置于固体培养基上，在其