一种快速构建35S组成型植物双价表达载体的方法.pdfVIP

生物技术通报 年第 期 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2009 2 一种快速构建35S 组成型植物双价表达载体的方法 刘明坤 刘昌财 许志茹 魏志刚 阎秀峰 刘关君 （东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室，哈尔滨150040） 摘 要： 通过对几种常用植物表达载体的35S和Tnos序列进行比对，设计带有酶切位点的引物35S和Tnos，通过 PCR克隆了同时带有35S和Tnos序列的目的基因片段，通过定向的酶切、连接获得双价表达载体。此方法简化了植物双 价表达载体构建过程，具有明显时间短、效率高、不需要中间载体、检测简单等特点，而且引物对于多数常用35S组成型植 物表达载体是通用的，为快速构建35S组成型植物双价表达载体提供了一种新方法。 关键词： 35S Tnos pROKⅡ 双价表达载体 A Fast Method of Constructing 35S Constitutive Plant Dual-gene Expresses Vectors （The Laboratory of Forest Genetics and Breeding and Biotechnology of Ministry of Education ，Northeast Forestry University，Harbin 150040） Abstract ： This article reported a-simple，general，effective dual -gene - -testing. Key words ：35S Tnos pROKⅡ-geneDualexpression vectors 随着生物技术迅速发展，通过基因工程对植物 通过对 35S 组成型植物表达载体比对后设计了一 进行有目的的改造已经成为了可能，但多是对单个 对通用引物， 由于引物本身可以更换酶切位点，解 基因操作转化。 然而自然界中生物许多性状往往是 决了中间载体单一性克隆位点的问题，为多基因转 由多个基因控制，一般生化代谢途径需要多种酶催 化提供了新方法，此方法和传统方法相比，具有明 化作用才能完成，并且有时单个基因转化常表现为 显速度快和兼容性高等特点，为 35S 组成型植物双 超强表达或抑制沉默，同时转入两个或两个以上起 价表达载体的构建提供了一个新方法。 [1] 协同作用的基因对于植物转基因是迫切需要的 。 1 材料方法 将目的基因构建在同一个表达载体上，多基因表达 1.1 材料 载体构建完成后，只需要一次转化就可方便地获得