高效液相色谱在生物医药研究中的应用第八讲高效液相色谱法分析体内药物及代谢产物.pdfVIP

讲 座 高效液相色谱在生物医药研究中的应用 第八讲 高效液相色谱法分析体内药物及代谢产物 谢福明 （中国科学院上海药物研究所，200031） 体内药物及其代谢产物的分析研究将为药浓 存的蛋白质，可同时完成纯化和富集过程，因此也常 度、药效和毒性之间的关系，为药物作用机理及药代 被应用。 动力学的研究提供科学的依据，因此近年来的进展 二（）提取 令人瞩目，已成为药物研究的重要分支，并形成了一 从生物样品中提取待测物通常有液相提取和固 门新型的学科— 《临床生物药物分析》。 相提取两种，分析超微量化合物时尤为必要。 由于体液中药物及代谢产物含量极微，又与大 液相提取亦即溶剂提取，常用的有机溶剂有：正 量内源性成分相混杂，因此，只有分析方法可靠才能 醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、苯及正己烷 保证分析结果准确。气相色谱-质谱法G（C-MS）是分 等等以及它们的混合溶液。有时为了减少乳化可加 析微量乃至超微量化合物的有力工具，在这一领域 入少量的甲醇或乙醇。为了有效地提取酸、碱性药 中应用颇多。但是许多药物和代谢产物缺乏挥发性 物，通常需要调节样品的pH，碱性药物一般调至高 和热稳定性，限制了它的应用。近年来，高效液相色 于其pKa1 2个单位，酸性药物则调至低于其pKa 谱法 H（PLC）以适用范围广、分离效率高、组分易回 1 2个单位，使药物处于非解离状态而易被提取。提 收及快速简便为特点，伴以灵敏度高、选择性强的检 取高度电离的化合物 如（季铵盐或磺酸盐）以及两性 测器的开发和应用，在诸多的分析方法中后来居上， 化合物 如（氨基酸）时，则须加入离子对试制。酸性化 成为分析体内药物和代谢产物的不可缺少的手段之 合物一般选用季铵盐或叔铵盐，碱性化合物则选用 烷基或芳基磺酸盐类以形成离子对，提高有机溶剂 本文根据近年来的进展，就生物样品的前处理、 的提取效率。 生物样品的直接进样、分离和检测系统的选择以及 由于有机溶剂一般有毒易燃，蒸发去除溶剂可 未知物的鉴定等进行一些方法学的讨论。 能引起待测物损失以及有时出现乳化现象等，因此， 更为简便有效的提取方法成为寻求的目标。其中固 8-1生物样品前处理 相提取法显示出广阔的前景[1] 为了去除内源性成分的干扰，保证色谱柱的柱 经典的固相提取剂有氧化铝、活性炭及硅藻土 效和寿命，进行生物样品的前处理是极其重要的。 等。由于氧化铝能选择地吸附邻酚羟基化合物，因此 （一）去除蛋白质 至今仍常使用，通常在弱碱性介质 pH8左右）中进 常用的蛋白质沉淀剂包括有机溶剂 （乙腈、甲 行吸附，水洗去杂质后用酸洗脱待测物。 醇、乙醇及丙酮等）、碳酸铵盐、无机酸 三（氯乙酸、高 非离子型树脂AmberliteXAD系列产品，既适用 氯酸等）和重金属盐 汞（盐、钨酸盐及铜盐等）。由于 于弱极性化合物又可用于强极性化合物的提取，还 经有机溶剂或酸处理后的生物样品与反相HPLC分 可用于酸、碱和中性药物的同时提取，并能在其上直 析相匹配，因此应用最为广泛。 接进行样品衍生化，因此应用日增。 近年来，用微孔膜滤除蛋白质的方法已见报道，